収縮・弛緩時の伊東細胞における細胞骨格の変化

伊藤细胞收缩和舒张过程中细胞骨架的变化

• 批准号: 08770419
• 负责人: 坂本 雅晴
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770419/
• 关键词: エンドセリン-1; アクチン; ミオシン; デスミン; 伊東細胞

培養伊東細胞は,エンドセリン-1(ET-1)により収縮することが知られている。また,同細胞は細胞質にアクチンやミオシンなどの収縮性蛋白が存在し,これらの物質が伊東細胞の収縮や弛緩に強く関与していることが推測される。そこで今回,収縮した伊東細胞内の細胞骨格の変化について検討した。伊東細胞は,Wistar系雄性ラット肝より分離し24時間培養した。共焦点レーザー走査型顕微鏡を用いた蛍光抗体間接法により,ET-1添加前後の伊東細胞内のアクチンやミオシン,さらにデスミンの局在について検討した。また,細胞内Ca^<2+>の変化はFluo-3AMを含むハンクス液を作製し共焦点レーザー走査型顕微鏡にて観察した。その結果200pMのET-1を添加することにより,伊東細胞内のアクチンやミオシンは核周囲への集簇,そして細胞質辺縁に限局的な線維の集合束として観察された。デスミン線維は核周囲に集簇し,細胞質のデスミン線維は減少していた。次にCa^<2+>の変化を観察すると,ET-1添加前は細胞質全体にCa^<2+>の分布がみられたが,200nMのET-1を添加するとCa^<2+>の分布は核周囲から細胞質,およびその細胞質辺縁に移動し分布していた。その後,約2分30秒後にはET-1添加前の分布に近い状態まで回復した。このように,収縮した伊東細胞の核周囲にアクチンやミチシン,さらにはデスミン線維が集束していた。また,ET-1添加によりCa^<2+>の分布が細胞質辺縁へと変化した。このことから,培養伊東細胞はアクチンやミオシン,あるいはデスミンなどの細胞骨格の相互作用により収縮の調節が行われると同時に,Ca^<2+>が収縮に大きく関与しているものと考えられる。

Ito cells were cultured in vitro, and ET-1 cells were cultured in vitro. In addition, contractile proteins exist in the cytoplasm of the same cell, and it is speculated that these substances are strongly related to contractile proteins in Ito cells. In this case, the cell skeleton in Ito cells was transformed into a new cell. Ito cells were isolated from Wistar male line and cultured for 24 hours. Confocal point microscope-based detection was carried out using indirect light antibody method. The results showed that ET-1 could be detected in Ito cells before and after addition. Also, the changes in intracellular Ca^<2+> were observed using a confocal microscope using a Fluo-3AM-containing solution. As a result, ET-1 at 200pM was added to Ito cells, which were clustered around the nucleus and clustered around the cytoplasm. The cell line is clustered around the nucleus, and the cytoplasm is reduced. Ca^<2+> distribution in cytoplasm was observed before ET-1 addition, Ca^<2 +> distribution in cytoplasm was observed after ET-1 addition, Ca^<2+> distribution in cytoplasm was observed before After about 2 minutes and 30 seconds, ET-1 was added and the distribution returned to its normal state. The nuclear cycle of Ito cells is divided into two groups: one is the nuclear cycle, the other is the nuclear cycle. The addition of ET-1 to Ca^<2+> and its distribution in the cytoplasm were changed. In culture of Ito cells,Ca^<2+> was found to regulate cytoskeletal interactions.

项目成果

Masaharu Sakamoto: "Relaxing effect of interleukin-1 on rat cultured Ito cells" Hepatology. (in press). (1997)

Masaharu Sakamoto：“白细胞介素 1 对大鼠培养的 Ito 细胞的松弛作用”肝病学。

坂本雅晴: "培養伊東細胞における収縮と細胞骨格" 細胞骨格研究会. 7(in press). (1997)

Masaharu Sakamoto：“培养的伊藤细胞中的收缩和细胞骨架”细胞骨架研究组 7（出版中）。