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心筋細胞におけるサイトカインの生理的、病態的意義の検討

心肌细胞细胞因子的生理和病理意义的检查

基本信息

批准号：
08770495
负责人：
廣田久雄
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770495/
关键词：
gp130 leukemia inhibitory factor cardiotrophin-1 JAK1 STAT3

项目摘要

信号伝達性の膜蛋白gpl30は、複数のサイトカイン|interleukin-6 (IL-6),ciliary neurotrophic factor (CNTF),leukemia inhibitory factor (LIF),cardiotrophin-1 (CTー1)など|の受容体複合体に共通に用いられ、これらサイトカインの信号を細胞内へ伝えるのに必須の分子である。特にLIF,CT-1は培養心筋細胞に対して肥大作用を示すが、その生理作用については不明な点が多い。我々はトランスジェニックマウスを用いて、gp130を恒常的に活性化すると心筋肥大が生じることを明らかにしており、gp130の信号伝達系が心筋の機能調節に重要な働きをしている可能性をこれまでに示した。1.gp130の下流の信号伝達分子の活性化とターゲット遺伝子の解析:心筋細胞においてgp130を刺激し、JAKSTAT経路とMAP経路が活性化されるか否かを検討した。LIF刺激後の心筋細胞において刺激早期にgp130、JAKI、STAT3のリン酸化を認め、さらにERK1、ERK2の一過性の活性亢進を確認した。下流分子の解析として、心房性Na利尿ペプチド、cーfosなどの遺伝子について検討した。LIF刺激によりこれらの遺伝子の転写が亢進した。今後は、STAT3 dominant negativeを心筋細胞に導入することにより、真のターゲット遺伝子を解析する予定である。2.CT-1受容体(R)のクローニング:CT-1Rに相同性が高いと考えられるIL-6R、IL-11R、CNTFRに共通に認められるアミノ酸配列(PDPP・WSXWS)をもとにマウス心筋細胞mRNAからRT-PCRを行い、相同部分を含む270bpのcDNA断片を得た。同cDNA断片をプローブにした臓器別ノーザンブロットでは心臓と骨格筋に発現を認めた。今後このcDNA断片を用いてマウス心臓由来cDNAライブラリーをスクリーニングし、そのcDNAの全塩基配列の決定と細胞での再構成実験から、単離したものがCTー1受容体であることを確認しgp130との関わりを検討する。さらにCTー1受容体cDNAをプローブにして同受容体の発現分布の発現制御を解析する。

Signaling and expression of membrane protein gpl30| interleukin-6 (IL-6),ciliary neurotrophic factor (CNTF),leukemia inhibitory factor (LIF),cardiotrophin-1 (CTー1)など|The receptor complex is commonly used for signaling intracellular signaling and essential molecules. In particular, LIF,CT-1 has been shown to play an important role in hypertrophy of cultured cardiac muscle cells, and its physiological effects are unknown. The signal transmission system of gp130 is important for the regulation of cardiac muscle function. 1. Analysis of downstream signal transduction molecules of gp130: stimulation of gp130 in cardiac muscle cells, activation of JAKSTAT and MAP pathways The activation of gp130, JAKI and STAT3 in the early stage of LIF stimulation and the transient hyperactivity of ERK1 and ERK2 were confirmed. Analysis of downstream molecules, atrial Na diuretic, c-fos, and trace elements LIF stimulation is the most important factor in the development of the disease. In the future, STAT3 dominant negative will be introduced into the heart muscle cells. 2. CT-1 receptor (R) was identified by RT-PCR. CT-1R was identified by IL-6R, IL-11R and CNTFR. The same cDNA fragments were identified by DNA sequencing. In the future, the cDNA fragment will be used to determine the complete sequence of cDNA fragments and the re-construction of the CT1 receptor. The expression of CT1 receptor cDNA was analyzed by PCR.