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アンジオテンシンII受容体蛋白翻訳調節の分子機構

血管紧张素II受体蛋白翻译调控的分子机制

基本信息

批准号：
08770525
负责人：
森泰清
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770525/
关键词：
アンジオテシンII 受容体蛋白翻訳

项目摘要

1.upstreamATGの点変異遺伝子作成:ラット・アンジオテンシンtype 1A受容体(AT_<1A>R)遺伝子エクソン1に存在するshort open reading frame(sORF)の開始コドンであるATG(upsteam ATG)の点変異をPCR法により作成。sORFを含んだ201bpのPCR産物を後述のCATレポーター遺伝子およびAT_<1A>A cDNAの5'上流に組み換え、発現プラスミドを得た。この際、実験の対照として、同領域の野生型の組み換え体も用意した。2.upstreamATG変異のAT_<1A>R発現に及ぼす効果:1)CAT発現系による評価…p201CAT(野生型)及びp201mCAT(変異型)をラット血管平滑筋(A10)細胞にリン酸カルシウム法により導入。導入した細胞のCAT活性を求め、並行して抽出した全RNAからCATmRNAレベルの変化を定量、比較した。結果、upstreamATGの点変異はCAT活性を約2.6倍に増加させたが、CATmRNAレベルには差を認めなかった。2)AT_<1A>R発現系による評価…pcAT_<1A>R(野生型)及びpcAT_<1A>Rm(変異型)をCos-7細胞に1)と同様に導入。発現したAT_<1A>R蛋白をウエスタン・ブロット法により定量すると変異型では野生型に比し、約2.5倍に増加した。しかし、AT_<1A>R mRNAレベルには変化を認めなかった。3.合成sORFペプチドのAT_<1A>R発現に及ぼす効果:上述のsORFによりコードされる11アミノ酸からなるペプチドを合成し、pcAT_<1A>Rmを鋳型としたreticulocytelysateによるin vitro転写・翻訳系の反応液中に添加。0〜30μmol/Lの同ペプチドは、AT_<1A>R蛋白産生量を濃度依存性に非添加群の24%まで抑制した。以上の結果は、ラットAT_<1A>RのupstreamATGより始まるsORFが、AT_<1A>R蛋白翻訳に抑制効果を有する可能性を示唆するものと考えられる。

1. The point variant of upstreamATG <1A>is generated by PCR method. The point variant of ATG(upsteam ATG) is generated by PCR method. The sORF contains a 201bp PCR product, which is obtained from the 5'upstream of CAT cDNA and AT_<1A>A cDNA. In this case, the wild type of the same field is not intended to be replaced by the wild type. 2. UpstreamATG variant AT_<1A>R expression and its results:1)CAT expression system was evaluated by p201CAT(wild-type) and p201mCAT(variant) gene transfer into vascular smooth muscle (A10) cells. CAT activity of introduced cells was quantified and compared with total RNA extracted. The results showed that the CAT activity of upstreamATG was increased by 2.6 fold, and CAT mRNA was decreased by 2.6 fold. 2)AT_<1A>R gene expression lines were evaluated by pcAT_<1A>R(wild-type) and pcAT_<1A>Rm(variant) in Cos-7 cells. AT_<1A>R protein was found to be about 2.5-fold higher than wild-type protein. AT_<1A>R mRNA is the most important gene in the human genome. 3. The AT_ R discovery of the synthetic sORF <1A>template and its benefits: the above sORF template is synthesized from 11 amino acids, and pcAT_<1A>Rm is added to the reaction solution of the vitro writing and flipping system to form and reticulocytelysate. 0 ~ 30μmol/L, ATR <1A>protein production was concentration-dependent and inhibited by 24% in non-additive groups. These results indicate the possibility of AT_<1A>R upstreamATG initiation and AT_<1A>R protein inversion inhibition.