K^+チャネル遺伝子の細胞特異的発現調節の分子機構

K^+通道基因细胞特异性表达调控的分子机制

• 批准号: 07770543
• 负责人: 森 泰清
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770543/
• 关键词: K^+チャネル; 遺伝子転写調節

(1)CATアッセイを用いた系によりラットKv1.5遺伝子の転写開始点から上流約200bpに存在する(GT)_<19>(CA)_<15>(GA)_<16>の二塩基繰り返しを含む184bpの配列(以下、KRE)が、Kv1.5遺伝子転写活性に及ぼす効果を検討した。結果、KREの存在はKv1.5発現細胞(GH3細胞)ではKV1.5遺伝子の転写活性に影響を及ぼさないが、非発現細胞(Cos-7及びCHO細胞)においては完全に転写活性を抑制し、陰性調節配列として作用していた。(2)KREをチミジンキナーゼ(TK)遺伝子のプロモーターにサブクローンし、異種の遺伝子での転写活性に対する影響(1)と同様にCATアッセイで評価した。KREはKv1.5非発現細胞ではTKプロモーターによる転写活性も抑制し、サイレンサーとして作用していた。(3)KREあるいはKREを含むKv1.5遺伝子5'領域の2.6kbは、ゲル電気泳動上それぞれのフラグメントの倍数状に移動度の異なるラダーを示したことより、in vitroでmultimeric formationを形成しうると考えられた。(4)KREを^<32>Pにより標識したプローブを用いたゲルシフト法により、GH3細胞の核蛋白内にKREに特異的に結合し移動するバンドが検出された。Cos-7、CHO細胞においても移動度の異なるバンドは得られたが、競合阻害実験により、これらはKREに特異的な結合ではなかった。以上より、KREはKv1.5遺伝子の細胞特異的発現調節に重要であり、その作用機序にはDNA立体構造変化の関与と結合する特異的核蛋白の存在が示唆される。

(1) When CAT Access is used, the two bases of (GT)_ (CA)_ (GA)_exist approximately 200bp upstream from the writing start point of the Kv1.5 gene<19><15>, including <16>the 184bp sequence (hereinafter, KRE), and the writing activity and effectiveness of the Kv1.5 gene are discussed. The results showed that the presence of KRE in Kv1.5-producing cells (GH3 cells) had no effect on the transcription activity of KV1.5 gene, and in non-producing cells (Cos-7 and CHO cells), it completely inhibited the transcription activity and negatively regulated the transcription activity. (2) The influence of KRE on the activity of KRE gene (TK) gene (TK gene) gene) gene (TK gene) gene) gene (TK gene) gene KRE inhibits the activity of TK in Kv1.5 non-developing cells. (3)KRE contains 2.6 kb of Kv1.5 gene 5'domain, and the difference in mobility of multiple in vitro formation is shown in the electric migration. (4) KRE-specific <32>binding to nuclear proteins in GH3 cells was detected by the KRE-specific binding assay. Cos-7, CHO cells, different degrees of mobility, different types of inhibition, different types of inhibition, different types of KRE The above, KRE Kv1.5 gene cell-specific regulation of the important role of the mechanism of action in DNA stereostructural transformation and binding to the existence of specific nuclear protein is indicated.