アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた筋ジストロフィー遺伝子治療に関する研究

利用反义寡核苷酸进行肌营养不良症基因治疗的研究

• 批准号: 08770560
• 负责人: 竹島 泰弘
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770560/
• 关键词: 筋ジストロフィー; 遺伝子治療; アンチセンスオリゴヌクレオチド; スプライシング

【背景】ジストロフィン遺伝子の欠失により、mRNA上での欠失している領域の塩基数が3の倍数+1あるいは+2(out-of-frame)であるとDuchenne型筋ジストロフィー症(DMD)となるが、3の倍数(in-frame)であるとより軽症なBecker型筋ジストロフィー症(BMD)となる。申請者は先にエクソン19内に存在するエクソン認識配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド(AS-oligo)によりエクソンをスキッピングさせることが可能であることをin vitroで明らかにしたが、このことを臨床に応用することができると、DMDの症例の欠失領域に隣接する1ないし数個のエクソンを、AS-oligoによりmRNA上から消失させ、欠失領域をin-frameに変え、表現型をDMDよりBMDに変更することが可能である。このような臨床応用を考える上での基礎研究として、試験管内でみられたAS-oligoによるエクソンスキッピングの誘導が培養細胞においても認められるか否かを検討した。【方法】ジストロフィン遺伝子エクソン19内に存在するエクソン認識配列に対するAS-oligoをリポフェクチン法によってヒトリンパ芽球様細胞に導入した。導入後経時的にジストロフィンmRNAを、RT-PCR法によって解析した。【結果と考案】AS-oligo導入6時間後よりエクソン19をスキップしたmRNAが認められるようになり、24時間後にはすべてのmRNAにおいてエクソン19のスキッピングが見られた。エクソン19以外のエクソンスキッピングは認められず、また他のエクソンに対するAS-oligoではエクソン19のスキッピングはみられなかった。培養細胞においてAS-oligoにより特異的にエクソンスキッピングを誘導することが可能であることが明らかとなった。このことは生体内においてこの機構を利用してDMDの遺伝子治療を行える可能性を示唆している。

[background] the number of missing tendons in the mRNA is 3

项目成果

S.Y.Patria: "A case of Backer muscular dystrophy resulting from the skipping of four contiguous exons(71-74)of the dystrophin gene during mRMA maturation" Proc.Assoc.Am.Physic.108(3). 308-314 (1996)

S.Y.Patria：“一例 Backer 肌营养不良症是由肌营养不良蛋白基因在 mRMA 成熟过程中四个连续外显子 (71-74) 的跳跃引起的”Proc.Assoc.Am.Physic.108(3)。

Z.A.D.Pramono: "Induction of exon skipping of the dystrophin transcript in lymphoblastoid cells by transfecting an antisense oligodeoxynucleotide complementary to an exon recognition sequence" Biophys.Biochem.Res.Commun.226. 445-449 (1996)

Z.A.D.Pramono：“通过转染与外显子识别序列互补的反义寡脱氧核苷酸，诱导淋巴母细胞中肌营养不良蛋白转录物的外显子跳跃”Biophys.Biochem.Res.Commun.226。

R.K.Pokharel: "Japanese cases of type 1 thanatophoric dysplasia exclusively carry a C to T transition at nucleotide 742 of the fibroblast growth factor receptor 3 gene" Biophys.Biochem.Res.Commun.227. 236-239 (1996)

R.K.Pokharel：“日本 1 型致死性发育不良病例仅在成纤维细胞生长因子受体 3 基因的核苷酸 742 处携带 C 到 T 的转变”Biophys.Biochem.Res.Commun.227。