エクソンスキッピング誘導による筋ジストロフィー遺伝子治療に関する研究

诱导外显子跳跃基因治疗肌营养不良症的研究

• 批准号: 11770406
• 负责人: 竹島 泰弘
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770406/
• 关键词: 筋ジストロフィー; 遺伝子治療; スプライシング; アンチセンスオリゴヌクレオチド

ジストロフィン遺伝子の欠失により、mRNA上で欠失している領域の塩基数が3の倍数+1あるいは+2(out-of-frame)であるとDuchenne型筋ジストロフィー症(DMD)となるが、3の倍数(in-frame)であるとより軽症なBecker型筋ジストロフィー症(BMD)となる。申請者は先にジストロフィン遺伝子エクソン19内にスプライシング部位決定に重要な塩基配列であるスプライシング促進配列(SES)が存在し、さらにSESに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド(AS-oligo)によりスプライシングの過程においてエクソン19のスキッピングを誘導し得ることをin vitro、培養細胞およびマウスへの全身投与において明らかにした。このことを臨床に応用すると、DMDの症例の欠失領域に隣接するエクソンをAS-oligoによりmRNA上から消失させ、欠失領域の長さををout-of-frameからin-frameに変換し、表現型を軽症化することが可能である。現在、エクソン20に欠失を有するDMD症例に対してAS-oligoを投与し、エクソン19のスキッピングを誘導することによる治療の臨床応用の準備段階に入っている。今回、このような治療の適応を拡げるために、ジストロフィン遺伝子の欠失好発部位(エクソン44-52)周辺のエクソンにおけるSESを検討した。in vitroスプライシング系において、ショウジョウバエのdsx遺伝子エクソン3・イントロン3・エクソン4より成るmRNA前駆体は、エクソン4にSES活性を有する塩基配列が付加されることによりイントロン3のスプライシングが誘導される。このことを利用しジストロフィン遺伝子エクソン43、46、53内のSES候補配列の活性を検討した。その結果エクソン43、53においてSES活性を有する塩基配列が同定された。これらのSESに対するAS-oligoによりエクソンスキッピング誘導することが可能であると、スプライシングを制御することによるDMDに対する治療の適応を拡大することが可能である。

Duchenne type muscle disorder (DMD) multiple of 3 (in-frame) multiple of 3 (Becker type muscle disorder) multiple of 3 (BMD) multiple of 3 (out-of-frame) multiple of 3. The applicant shall first determine the position of the application within the system 19, determine the important base arrangement, determine the application promotion arrangement (SES), and then determine the position of the application promotion arrangement (SES).(AS-oligo)- This is a clinically useful approach to DMD, and it is possible to identify the missing region in the AS-oligo region, and to identify the missing region in the out-of-frame, and phenotype. Now, there is a lack of AS-oligo in DMD cases, and it is necessary to prepare for the clinical use of AS-oligo treatment. This time, the appropriate treatment for the treatment of the disease, the treatment of the disease. In vitro gene expression system, gene expression system, dsx gene expression system, dsx gene expression system, The activity of SES candidate arrays in 43, 46 and 53 was investigated. The results showed that the activity of 43 and 53 enzymes was the same. For example, if you want to use a DMD, you can use a DMD.

项目成果

Pramono Z.A.D.: "A novel cryptic exon in intron 2 of the human dystrophin gene evolved from an intron by acquiring consensus sequences for splicing at different stages of anthropoid evolution."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 321-328 (2000)

Pramono Z.A.D.：“人类肌营养不良蛋白基因内含子 2 中的一个新的神秘外显子是通过获取在类人猿进化的不同阶段进行剪接的共有序列而从内含子进化而来的。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 321-328 (2000

A.Surono,Y.Takeshima et.al.: "Circular dystrophin RNAs consisting of exons that were skipped by alternative splicing"Hum.Mol.Genet.. 8. 493-500 (1999)

A.Surono，Y.Takeshima 等人：“由通过选择性剪接跳过的外显子组成的环状肌营养不良蛋白 RNA”Hum.Mol.Genet.. 8. 493-500 (1999)

D-H.Chen,Y.Takeshima et.al.: "A novel deletion of the dystrophin S-promotor region cosegregating with mental retardation"Neurology. 52. 638-640 (1999)

D-H.Chen，Y.Takeshima 等人：“抗肌营养不良蛋白 S 启动子区域的新型缺失与智力低下共分离”神经病学。

Wibawa T.: "Complete skipping of exon 66 due to novel mutations of the dystrophin gene was identified in two Japanese families of Duchenne muscular dystrophy with severe mental retardation."Brain Dev.. 22. 107-112 (2000)

Wibawa T.：“在两个日本杜氏肌营养不良家族中发现了由于抗肌营养不良蛋白基因的新突变而导致的外显子 66 的完全跳跃，并伴有严重的智力迟钝。”Brain Dev.. 22. 107-112 (2000)

Suminaga R.: "Analysis of a nonsense mutation of the alpha-actinin-3 gene in Japanese patients with dystrophinopathy."Am.J.Med.Genet.. 92. 77-78 (2000)

Suminaga R.：“日本肌营养不良症患者 α-actinin-3 基因无义突变的分析。”Am.J.Med.Genet.. 92. 77-78 (2000)