皮膚Tリンパ球前駆細胞におけるE-Cadherinの発現および接着についての研究

皮肤T淋巴细胞祖细胞E-Cadherin表达及粘附研究

• 批准号: 08770639
• 负责人: 小方 冬樹
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770639/
• 关键词: マウス; 胎仔皮膚; T細胞分化

今回、C57BL/6マウスを用いて胎仔皮膚におけるT細胞分化の免疫学的研究を行った。方法:(1)胎生15.5〜18.5日のマウス胎仔、新生仔、成獣より皮膚を採取し、EDTAあるいはチオシアン酸アンモニウム処理後、真皮、表皮を分離し、トリプシン、コラゲナーゼなどの処理によりsingle cell suspensionを作製する。FITC抱合した抗Thy-1、CD45,TCRαβ、TCRγδ、Vγ3抗体にて染色し、FACSにて解析した。同時に、コントロールとして胸腺を採取し、染色した。(2)(1)と同様な方法にて皮膚シートを作成した後、スライドグラスに貼付け、冷アセトンにて固定する。FITC-抗Thy-1と、それぞれPE-抗c-kit,Sca-1,IL-2Rα、IL-2Rβ、CD3,CD4,CD8にて二重染色を施行した。(3)マウスより皮膚を採取、凍結後、クライオスッタットにて標本を作成、(1)と同様な抗体を加え、ABC法により染色(基質はペルオキシターゼ、およびアルカリフォスファターゼを使用)し、観察を行った。(4)また、マウス胎仔皮膚を無菌下に採取し、表皮、真皮を分離後、single cell suspension を作製する。この細胞をコンカナバリンA、IL-2の存在下で培養、FACSにて解析した。結果:(1)胎仔期表皮のαβT細胞はわずかに発現をみるのみであったが、一方で、γδT細胞は胎生15.5日から新生仔にかけて徐々に増加傾向した。また、真皮では胎生15.5日にαβ、γδT細胞の存在が確認されたが、両population共に減少傾向を示し生後はほぼ消失した。これらは、胸腺とは異なる分化パターンを示した。(2)胎生13.5および14.5日の比較的はやい段階でThy-1/c-kit,Thy-1/IL-2R double positiveが存在した。(3)凍結標本も(1)の結果を裏付ける所見が得られた。(4)これらの細胞は上記の方法では培養が不可能であった。

Immunological study of fetal skin differentiation using C57BL/6 Methods:(1) After 15.5 ~ 18.5 days of fetal birth, newborn and adult skin were collected, treated with EDTA, dermis and epidermis were separated, treated with EDTA, and treated with single cell suspension. FITC conjugation and analysis of antibodies against Thy-1, CD45,TCRαβ, TCRγδ, Vγ3 by FACS. At the same time, the color of the thymus was changed. (2)(1) After the skin is prepared in the same way, the skin is attached to the skin and fixed in the cold. FITC-anti-Thy-1, PE-anti-c-kit,Sca-1,IL-2R α, IL-2R β, CD3, CD4, CD8 were double stained. (3)After the skin is taken, frozen, the skin is prepared,(1) the same antibody is added, ABC method is used for staining (matrix is used), and observation is carried out. (4)The fetal skin is collected aseptically, and the epidermis and dermis are separated to prepare a single cell suspension These cells were cultured in the presence of IL-2 and IL-4, and analyzed by FACS. Results:(1) αβT cells in fetal epidermis showed an increasing tendency to develop from day 15 to day 15 after birth. The presence of αβ and γδT cells was confirmed at 15.5 days after birth in the dermis and dermis, and the decrease in population showed that they disappeared after birth. The difference between the two is obvious. (2)Thy-1/c-kit, Thy-1/IL-2R double positive exists. (3)The result of freezing Li (1) is that (4)It is impossible to culture the cells.