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シングルセル解析を用いたマウス胎仔皮膚再生メカニズムの解明

利用单细胞分析阐明小鼠胎儿皮肤再生机制

基本信息

批准号：
22H03252
负责人：
貴志和生
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03252/
关键词：
胎仔皮膚再生シングルセル解析皮膚再生 single cell

项目摘要

E13, E15, E17の創傷作成後24時間、48時間の創傷部辺縁皮膚ならび対側の正常皮膚を顕微鏡下に採取し、Chromium　10X Genomicsを用いて、Single cell解析を行い、皮膚の完全再生に働く細胞の組み合わせとその膜表面マーカー、真皮のリモデリングを起こさせ、真皮を再生させる細胞とそのマーカーの絞り込みを行った。ICR妊娠マウスを購入し、妊娠13日15日ならびに17日のマウスを全身麻酔下に開腹し、顕微鏡下に子宮を切開し胎仔手術を行い、胎仔側胸部に約2㎜の皮膚全層切開創を作成し、創部を回収後にコラゲナーゼ、ディスパーゼを含んだ混合試薬で組織を消化し、フィルターをかけ、創傷部周辺の細胞を回収する。回収した細胞の生存率、デブリの有無を確認した後に、Chromium　10X Genomicsを用いて、数千個の細胞に関してsingle cell transcriptome 3’遺伝子発現プロファイルとこれを用いたマルチオミックスを行った。Chromium controller装置を使用して、10xバーコードを付加したライブラリーの構築を行い、数千個のそれぞれの細胞から転写プロファイリングを実地し、類似のプロファイルを持つ細胞種をクラスターで特定し、それぞれの再生過程で発現している細胞種とその発現遺伝子の差異について解析を行った。

The skin at the edge of the wound and the normal skin on the opposite side of the wound at 24 and 48 hours after the wound was made at E13, E15, and E17 were taken under a microscope. Chromium 10X Genomics was used, Single cell analysis was performed, and the composition of the cells involved in the complete regeneration of the skin was revealed. The membrane surface and the dermis were reorganized, and the cells and tissues of the dermis were regenerated. ICR pregnancy purchase, pregnancy 13 days 15 days 17 days 13 days 15 days 17 days 18 days 17 days 18 days 19 days 18 days 19 days 19 days 1 After confirmation of cell survival, presence or absence of Chromium 10X Genomics, thousands of cells were involved in single cell transcriptome 3 'gene development. Chromium controller devices are used to enhance the construction of cell culture, implement the development of thousands of cell cultures, and analyze the differences between cell culture and the development of cell cultures similar to the development of cell culture and regeneration processes.