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伝染性軟属腫ウイルスにおけるチミジンリン酸化酵素遺伝子の同定

传染性软疣病毒胸苷激酶基因的鉴定

基本信息

批准号：
08770641
负责人：
渡邊孝宏
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770641/
关键词：
伝染性軟属腫ウイルスチミジンリン酸化酵素

项目摘要

本研究では遺伝子工学的手法を用いて伝染性軟属腫ウイルス(molluscum contagiosum virus,MCV)DNAのクローニングを行い、チミジンリン酸化酵素(thymidine kinase,TK)をコードしている遺伝子(TK gene)の同定を試みた。まず患者より摘除した伝染性軟属腫より蔗糖勾配法によりMCVのウイルス粒子を分離、精製した。ウイルス粒子よりMCV-DNAを抽出し、制限酵素Hind III、BamH I、Cla Iで切断したところ、アガロースゲル電気泳動にてMCV type 1のvariantに一致したDNAの切断パターンがみられた。このDNA断片をプラスミドpUC19、pBR322またはコスミドcharomid9に挿入しクローニングを行い、最終的に両端ヘアピン部を除くMCV-DNAの全領域をコードするgene libraryを作製した。過去の報告によればボックスウイルスの間ではTK遺伝子の塩基配列の相同性が高いとされているので、Southern hybridationによるTK遺伝子のscreeningを試みた。ワクチニアウイルスのJ fragment内にはTK遺伝子がコードされているが、これをプローブとしてSouthern hybridationを行ったところCla IのF断片とhybridizeした。Cla IのF断片をTK-negativeのワクチニアウイルスに挿入し、methtrexate存在下でこの遺伝子組み換えウイルスの継代を試みたが継代は不可能であり、TK遺伝子の機能は確認出来なかった。Cla IのF断片の塩基配列を調べたところワクチニアウイルスのJ fragmentと非常に相同性の高い塩基配列がみられたが、TK遺伝子に類似した配列はみられなかった。従ってMCVにはTK遺伝子は存在しないと考えたが、その完全な証明にはMCV-DNAのfull sequenceが必要である。

In this study, the method of engineering was used to determine the same level of acid enzyme (thymidine kinase,TK), acidifying enzyme (thymidine kinase,TK), acid enzyme (TK gene) and so on. Patient extraction, staining, sucrose matching, MCV, particle separation, spermatozoa. The restriction enzyme MCV-DNA III, BamH I, Cla I, MCV type 1 variant were used to cut the enzyme concentration in DNA. The DNA fragments, the pUC19, the pBR322 fragments, the charomid9 fragments, the gene library segments, the gene library segments. In the past, reports have been assigned to TK subsets based on homogeneity, screening, TK, and screening, respectively. In the J fragment, there are TK fragments, hybridize fragments, and Cla I fragments. In the presence of Cla I