ダウン症によるマイクロサテライトリピートによる21番染色体の由来検討

唐氏综合症引起的微卫星重复导致 21 号染色体起源的调查

• 批准号: 08770910
• 负责人: 佐々木 美津代
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770910/
• 关键词: ダウン症; マイクロサテライトリピート

ダウン症児とその両親100組300のDNAを抽出し、PCRを用いて多型を検索した。tetra-nucleotide repeatをはさむprimerを設計し、GeneAmp PCR Systen Model 9600によって増幅した。温度設定、増幅回数を決定し、安定したバンドが描出できるようになった。4%のAgarose-gelで電気泳動しポラロイド写真をスキャナーで取り込みNIH image softで半定量する事を試みた。tetra-nucleotide repeatではバンドが明瞭であり、多型の検出には効果的であった。しかし、repeat数が1〜5回と少なく、4baseの差は4%のAgasrose-gelでの分離ではポラロイド写真をスキャナーで取り込んだ際に2本のバンドと判別できず、半定量に関しても問題があり、Heterozygosityが低いため十分な情報が得られなかった。現在、多数のprimerが設定されているCA repeatで今回の方法を検討してみた。なるべくsize rangeの大きいものでPCRの条件を設定したがtetra-nucleotide repeatと比較して明瞭なバンドが得られにくくバンドがはしご状となり、コンピュータでのバンドの判別は難しかった。また、分離を明瞭にしようとgel濃度を上げるとhetero duplexを形成する。このバンドを明瞭にするためRIを用いたsecond PCRを行いdenature gelに泳動したところ比較的明瞭なバンドが得られた。そこでdenature gelを用いる事にした。RIを使用せずに、21番トリソミ-の3本のバンドの分離によっては1:2の分離を判別する半定量が行えるように蛍光primerを用いてオートシークエンサーを利用する方法を検討中である。現在、市販のPanelを用いて検討しているが、良好な結果が得られたら手持ちのprimerを蛍光標識して多型を検討していく。

The patients were randomly divided into two groups: 100 groups of 300 DNA extractors, and PCR was used to detect polymorphisms. The tetra-nucleotide repeat software is designed for primer, and the GeneAmp PCR Systen Model 9600 software is available for framing. The temperature setting, amplitude return count determination, and stability response are determined by the temperature setting. 4% Agarose-gel electrophoretic swimming, photo shoot, photo shoot, NIH image soft, semi-quantitative email. Tetra-nucleotide repeat has a clear understanding of the genetic and polymorphic characteristics of the fruit. The error number of repeat is 1: 5, the number of Agasrose-gel is 4%, the number of Agasrose-gel is 4%, the number of Agasrose-gel is less than 4%, the number of Heterozygosity is less than 1%, the number of QR is 1%, and the number of QR is 4%. Currently, most of the primer settings do not change the CA repeat. This time, the method does not affect the performance. The setting of the conditions for size range and PCR conditions does not allow you to know that if you do not know how to do so, you will need to know that you are suffering from a bad situation. It is clear that the hetero duplex is formed on the gel degree. Do not know how to use the RI to second PCR the swimming activities of the denature gel and compare the results. The word "denature gel" means "I don't know what to do. RI is used to determine whether or not to use the semi-quantitative method to determine the accuracy of the system. The method is based on the accuracy of the method used to determine the accuracy of the primer system. At present, the market Panel system uses good results to find out that the handheld primer device is used for identification of polymorphisms.