HLA-A2601拘束性扁平上皮癌特異的癌退縮抗原遺伝子クローニングと臨床応用

HLA-A2601限制性鳞状细胞癌特异性癌消退抗原基因克隆及临床应用

• 批准号: 08771008
• 负责人: 今井 康久
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771008/
• 关键词: 癌退縮抗原; 扁平上皮癌; 遺伝子クローニング; CTL; HLA拘束性; 食道癌; 癌ワクチン

本研究では主として本邦においても高頻度に認められるヒト扁平上皮癌より特異的CTLによって認識される抗原ペプチドの同定を試みた。即ち食道癌細胞株(KE4)よりcDNAライブラリーを作製し、HLA-A2601遺伝子と共にヒト腺維芽細胞株(VA13)にtrasfectしたのちKE4に対するHLA-A2601拘束性CTL株を添加し、それによるIFNgの産生を指標にして目的抗原をコードする遺伝子をスクリーニングした。その結果、777bpのORFを含む991bplの遺伝子を、クローニングした。その991bp遺伝子をプローブとして、さらに解析した結果2507bp長の遺伝子が同定された(SART-1遺伝子と仮称)。このSART-1遺伝子は、mRNAレベルで全ての正常及び癌認識に発現しており、睾丸おいては強発現している。しか、同蛋白(777bpのORFのコードする259アミノ酸)は抗SART-1抗体とwestern blot法での解析より正常組織では睾丸及び胎児肝のみ、また癌組織では頭頸部癌・食道癌の殆ど、非小細胞性癌の5割に発現されていることが示唆された。またSART-1蛋白(259アミノ酸)のうちKE4-CTLに認識される抗原部位は、実験よりORFの3′-側から186bpに抗原ペプチドがコードされていることが示唆された。そこで、10merのペプチドを22種類合成し、それぞれをHLA-A2601およびHLA-A0201遺伝子をtransfectしたVA13にロ-ディングし、これを標的としてKE4-CTLの反応性を調べたところ、3種類のペプタイドが抗原となり得る事が示唆された。このことから、宿主のキラーT細胞によって特異的に認識される癌退縮抗原がヒト扁平上皮癌の細胞に存在するが示唆され癌ワクチン開発の可能性が示された。

In this study, we tested the high frequency of CTL specific to squamous cell carcinoma. That is, esophageal cancer cell line (KE4) contains cDNA fragments for gene expression, HLA-A2601 gene fragments for co-expression, and VA13 cell line contains HLA-A2601-restricted CTL. The 777bp ORF contains the 991 bp fragment. The 991bp sequence was analyzed and the 2507bp sequence was identified (SART-1 sequence). The SART-1 gene, mRNA, and protein are fully expressed in normal and cancerous tissues, and strongly expressed in testis. Anti-SART-1 antibodies and Western blot analysis of the same protein (ORF of 777bp at 259 amino acids) were detected in normal tissues, testicular and fetal liver cancer tissues, head and neck cancer, esophageal cancer, and non-small cell carcinoma. SART-1 protein (259 amino acid) was identified by KKE 4-CTL in the antigen site, and the 3′-side of ORF was identified by KKE 4-CTL. Therefore, 22 types of 10-mer peptides were synthesized and used to transfer HLA-A2601 and HLA-A0201 genes to VA13. This target was used to adjust the reactivity of KE4-CTL and to obtain 3 types of peptide antigens. The presence of tumor regressive antigen in squamous cell carcinoma cells indicates the possibility of tumor regressive development by specific recognition of tumor regressive antigen by host T cells.

项目成果

Itoh K et al.: "Development of Cancer Vaccine by Tumor Rejection Antigens." Kumagai K and Kasakura S,Springer Verlag (in press), (1997)

Itoh K 等人：“通过肿瘤排斥抗原开发癌症疫苗。”

Itoh K et al.: "人の腫瘍抗原とワクチン" 外科治療. 74. 219-224 (1996)

Itoh K 等人：“人类肿瘤抗原和疫苗”《外科治疗》74. 219-224 (1996)。

Miyajima J et al.: "Higher susceptibility of erythropoietin-producing remel cell carcinomas to lysis by lymphokine-activated killer cells." J.Immunotherapy. (in press). (1997)

Miyajima J 等人：“产生促红细胞生成素的雷梅尔细胞癌对淋巴因子激活的杀伤细胞裂解的敏感性更高。”

Itoh K et al.: "Expression of MAGE-1 and-4 proteins in normal tissues and various cancers In : Melanogenesis and malignant melanoma ; biochemistry,cell biology et al." Hiri Y,Hearing V.J.,Nakajima J, 312 (1996)

Itoh K 等人：“MAGE-1 和-4 蛋白在正常组织和各种癌症中的表达：黑色素生成和恶性黑色素瘤；生物化学、细胞生物学等”。

Nakao M et al.: "HLA A2601-restricted cytotoxic T lymphocytes recognizing a peptide antigen expressed on squamous cell carcinoma." Cancer Res.55. 4248-4252 (1995)

Nakao M 等人：“HLA A2601 限制性细胞毒性 T 淋巴细胞识别鳞状细胞癌上表达的肽抗原。”