HLA-Cw0102拘束性癌退縮抗原遺伝子クローニングと臨床応用

HLA-Cw0102限制性肿瘤消退抗原基因克隆及临床应用

• 批准号: 09770983
• 负责人: 今井 康久
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770983/
• 关键词: 食道癌; HLA-Cw0102; CTL; 癌退縮抗原; 扁平上皮癌; 遺伝子クローニング; HLA拘束性

食道癌患者(HLA-Cw0102陽性)の転移リンパ節より得たリンパ球をIL2下で長期培養し、これらT細胞の各種癌細胞株に対する細胞傷害能をIFN7γ,^<51>遊離法で検討したところ、HLA-Cw0102拘束性C比株を樹立することができた。そこで、このCTLにより認識されるHLA-Cw0102陽性食道癌細胞株TEのcDNAライブラリーを製作し、HLA-Cw0102拘束性癌退縮抗原遺伝子の解析を以下のような方法で行った。HLA-Cw0102のプラスミドとTE8のcDNAライブラリーをCOS7(サル腎細胞株)にダブルトランススフェクトし、この遺伝子導入COS7とHLA-Cw0102拘束性癌特異的キラー細胞とを混合培養した。その上清のIFN-γ産生量をELISAにて測定することで目的の遺伝子を2種類同定することができた。これらの遺伝子をジデオキシン法にて塩基配列を解析し、全塩基配列を決定したところ、それぞれubiquitinとhiston H1 genomic DNAと同一のものであった。現在、これらの遺伝子のアミノ酸配列を決定し、それに基いてペプチドを製作を行っている。それらを自家Bcell由来のEBV-transfered Bcell lineへ結合させ、樹立した自家の癌特異的キラー細胞と反応させ、IFN-γ,^<51>Cr遊離法で測定する。その結果より癌抗原ペプチドを同定する予定である。

In patients with esophageal cancer (HLA-Cw0102 positive), cell damage was detected by IFN7γ in T cells cultured under IL2 for a long time, and <51>HLA-Cw0102-binding C strains were established. The following methods were used to analyze the cDNA sequence of HLA-Cw0102-positive esophageal cancer cell line TE and HLA-Cw0102-binding cancer regression antigen. HLA-Cw 0102 cDNA fragments were introduced into COS7(a kidney cell line) and cocultured with TE8 cDNA fragments. The amount of IFN-γ produced in the supernatant was determined by ELISA. The gene sequence analysis method is used to determine the gene sequence of the gene. Now, we have to decide on the allocation of resources and make a selection of resources. The EBV-transferred B-cell line binding assay was used to detect the presence of B-cell-specific IFN-γ and <51>Cr. The results of this study are as follows:

项目成果

Gotoh,M.,Inai,Y.,et al: "Seguence Analysis of genes encoding rodent homologues of the human tumor-rejection antigen SART-1." JJCR. 89. 849-855 (1998)

Gotoh, M., Inai, Y., 等人：“编码人类肿瘤排斥抗原 SART-1 啮齿动物同源物的基因的序列分析。”

Toh,U.,Inai,Y.,et al: "HLA-class-I-restricted and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes from metastatic lymphocytes from metastatic lymphonodes of esophageal cancers." Cell.Immunol.177. 137-143 (1997)

Toh,U.,Inai,Y.,et al：“来自食管癌转移淋巴结的转移淋巴细胞的 HLA-I 类限制性和肿瘤特异性细胞毒性 T 淋巴细胞。”

Toh U, Imai Y et al.: "HLA class I-restricted and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes from metastatic lymph nodes of esophageal cancers." Cellular Immunology. 177. 137-143 (1997)

Toh U、Imai Y 等人：“来自食管癌转移淋巴结的 HLA I 类限制性肿瘤特异性细胞毒性 T 淋巴细胞。”

Shichijo S, Imai Y et al.: "A gene encoding antigenic peptides of human squamous cell carcinoma recognized by cytotoxic T lymphocytes." J.Exp.Med.187(3). 277-288 (1998)

Shichijo S、Imai Y 等人：“编码人类鳞状细胞癌抗原肽的基因，可被细胞毒性 T 淋巴细胞识别。”

Shichijo,S.,Inai,Y.,et al: "A Gene encoding antigenic peptides of human sguamous cell carcinoma recognized by cytotoxic T lymphocytes." J.Exp.Med.187. 277-288 (1998)

Shichijo,S.,Inai,Y.,et al：“编码细胞毒性 T 淋巴细胞识别的人鳞状细胞癌抗原肽的基因。”