肺癌におけるHLA-A24/A26関連抗原の解析

肺癌HLA-A24/A26相关抗原分析

• 批准号: 08771049
• 负责人: 吉野 一郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771049/
• 关键词: 肺癌; 腫瘍内浸潤リンパ球; 癌所属リンパ節リンパ球; 細胞障害性Tリンパ球; 主要組織適合抗原; 腫瘍抗原

【目的】肺癌患者生体内の肺癌特異的細胞障害性Tリンパ球(CTL)を誘導し、認識する腫瘍抗原等を解析し、肺癌に対する特異的免疫療法の基礎とする。【実験1】CTLの誘導(方法)原発性肺癌の新鮮切除標本より腫瘍組織を摘出し酸素法・密度勾配重層円心法にて腫瘍内浸潤リンパ球(TIL)を分離、また郭清リンパ節よりLNLを分離。固層化抗CD3抗体にて48時間刺激後、IL-2(50IU/ml)にて10-14日培養し、腫瘍細胞株にて1回/週・2-3回刺激した。刺激にはPC-9(HLA-A2/A24、腺癌)、Sq-1(HLA-A24、扁平上皮癌)、QG56(HLA-A26、扁平上皮癌)、A549(HLA-26、腺癌)のうちHLA-Alocusの適合した株を用い、CTL活性は^<51>Cr-放出試験にて検索した。(結果)(1))固層化抗CD3抗体・IL-2による初期培養によりTIL・LNLは20-50倍に増殖した。(2)HLA-Alocusおよび組織型が伴に適合した肺癌細胞株にて刺激した15例中6例にCTLが誘導された。これらはすべてPC-9刺激を受けたHLA-A24陽性線癌症例であった。(結論)HLA-A2/A24は伴に日本人で頻度の高いhaplotypeであるが、このHLA-A2/A24に提示される肺癌共通抗原の存在が示唆された。【実験2】腫瘍抗原の同定(方法)上記(実験1)で明かにされた、共通の腫瘍抗原を有するPC-9より、pH3.3のクエン酸緩衝液にて細胞表面のHLA分子に結合した抗原ペプタイドを溶出し、更に逆層クロマトグラフィーにて展開して得られた各fractionについて、抗原提示細胞に反応させ、PC-9特異的CTLの反応を誘導するfractionを選定し、更にmass-spectrometerによりアミノ酸配列を決定する。(現状)HPLC-fractionを選定中である。

[objective] to analyze the specific cytotoxic T lymphocyte antigen (CTL) of lung cancer in patients with lung cancer, and to identify the specific antigen of lung cancer. [methods] CTL guidance (methods) Primary lung cancer was resected. Tissue samples were extracted by acid method, density matching, heart-immersion method, TIL, and Guo Qing, respectively. After 48 hours of stimulation with immobilized anti-CD3 antibody, IL-2 (50IU/ml) cells were cultured for 10-14 days, and the cell lines were stimulated for 2-3 times. Stimulation of PC-9 (HLA-A2/A24, adenocarcinoma), Sq-1 (HLA-A24, flat epithelial carcinoma), QG56 (HLA-A26, flat epithelial carcinoma), A549 (HLA-26, adenocarcinoma), CTL activity (^ & lt;51>Cr-). (results) (1) 20-50 fold colonization of anti-CD3 antibody TIL ·LNL in the initial stage of immobilization of anti-TIL antibody. (2) among the 15 cases of HLA-Alocus tumor tissue type with combined lung cancer cell lines, 6 cases were CTL positive. Cases of cancer were affected by PC-9 stimulation and were affected by HLA-A24. (conclusion) the presence of common antigen of lung cancer in the presence of HLA-A2/A24 was associated with high levels of haplotype and HLA-A2/A24 in Japanese. [methods] the same antigens (methods) show that there are PC-9 antigens, pH3.3 antigens, acid antigens, HLA molecules on the cell surface, antigens, antigens. The special CTL of PC-9 will lead to the selection of fraction and the determination of acid in the mass-spectrometer column. (shape) the HPLC-fraction has been selected as the medium size.