肺癌におけるHLA-A24/A26関連抗原の解析

肺癌HLA-A24/A26相关抗原分析

• 批准号: 08771049
• 负责人: 吉野 一郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771049/
• 关键词: 肺癌; 腫瘍内浸潤リンパ球; 癌所属リンパ節リンパ球; 細胞障害性Tリンパ球; 主要組織適合抗原; 腫瘍抗原

【目的】肺癌患者生体内の肺癌特異的細胞障害性Tリンパ球(CTL)を誘導し、認識する腫瘍抗原等を解析し、肺癌に対する特異的免疫療法の基礎とする。【実験1】CTLの誘導(方法)原発性肺癌の新鮮切除標本より腫瘍組織を摘出し酸素法・密度勾配重層円心法にて腫瘍内浸潤リンパ球(TIL)を分離、また郭清リンパ節よりLNLを分離。固層化抗CD3抗体にて48時間刺激後、IL-2(50IU/ml)にて10-14日培養し、腫瘍細胞株にて1回/週・2-3回刺激した。刺激にはPC-9(HLA-A2/A24、腺癌)、Sq-1(HLA-A24、扁平上皮癌)、QG56(HLA-A26、扁平上皮癌)、A549(HLA-26、腺癌)のうちHLA-Alocusの適合した株を用い、CTL活性は^<51>Cr-放出試験にて検索した。(結果)(1))固層化抗CD3抗体・IL-2による初期培養によりTIL・LNLは20-50倍に増殖した。(2)HLA-Alocusおよび組織型が伴に適合した肺癌細胞株にて刺激した15例中6例にCTLが誘導された。これらはすべてPC-9刺激を受けたHLA-A24陽性線癌症例であった。(結論)HLA-A2/A24は伴に日本人で頻度の高いhaplotypeであるが、このHLA-A2/A24に提示される肺癌共通抗原の存在が示唆された。【実験2】腫瘍抗原の同定(方法)上記(実験1)で明かにされた、共通の腫瘍抗原を有するPC-9より、pH3.3のクエン酸緩衝液にて細胞表面のHLA分子に結合した抗原ペプタイドを溶出し、更に逆層クロマトグラフィーにて展開して得られた各fractionについて、抗原提示細胞に反応させ、PC-9特異的CTLの反応を誘導するfractionを選定し、更にmass-spectrometerによりアミノ酸配列を決定する。(現状)HPLC-fractionを選定中である。

Objective: To induce lung cancer specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) in patients with lung cancer, analyze tumor antigens, and establish the basis for lung cancer specific immunotherapy. CTL induction (method) Fresh resection of primary lung cancer, tumor tissue extraction, acid method, density control, tumor infiltration, tumor ball (TIL) isolation, tumor clearance, and LNL isolation After 48 days of incubation with anti-CD3 antibody, the tumor cell line was stimulated with IL-2(50IU/ml) for 10-14 days at 1 cycle/week for 2-3 cycles. Stimulation of PC-9(HLA-A2/A24, adenocarcinoma), Sq-1(HLA-A24, squamous cell carcinoma), QG56 (HLA-A26, squamous cell carcinoma), A549(HLA-26, adenocarcinoma) and all HLA-Alocus compatible strains and CTL activity was detected by CD3 <51>+-releasing assay. (Results)(1) Stratified anti-CD3 antibody·IL-2 increased by 20-50 fold in early culture. (2)HLA-Alocus was associated with lung cancer cell lines and CTL was induced in 6 of 15 cases. The HLA-A24 positive line cancer cases were stimulated by PC-9. (Conclusion) The high frequency of HLA-A2/A24 association in Japanese suggests the existence of lung cancer common antigen. [Example 2] Identification of Tumor Antigens (Method) The above notes (Example 1) indicate that HLA molecules bound to the cell surface in a common tumor antigen, PC-9, pH3.3, and acid buffer solution are eluted from the antigen selection site, and further, that the antigen selection site is expanded to obtain various fractions, and that the antigen selection site indicates cell reaction, and PC-9-specific CTL reaction induction. The mass-spectrometer determines the acid sequence. (Status quo)HPLC-fraction selected.