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コンドロトランスフェリン遺伝子のクローニングと発現制御

软骨转铁蛋白基因的克隆及表达调控

基本信息

批准号：
08771609
负责人：
河本健
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771609/
关键词：
chondrotransferin melanotransferin chondrocyte cartilage

项目摘要

マウスATDC5細胞にインシュリンを添加して軟骨細胞へと分化誘導したのちにmRNAを抽出し、RT-PCRクローニング法によりコンドロトランスフェリン(CTF)cDNAをクローニングし、全塩基配列を決定した。そして次に、CTFのゲノム遺伝子のクローニング、および構造決定を試みた。まず、マウスゲノムライブラリーを作製して、CTFcDNAをプローブとしてスクリーニングを行い、約100万個のクローンから10個の陽性クローンを得た。得られたゲノムクローンを制限酵素で消化して、サザンブロットを行ったところ、これらのゲノムクローンで遺伝子の全長をカバーしており、CTF遺伝子の制限酵素地図を作製することができた。さらに、トータルサザンブロットを行い、CTF遺伝子が1つであるかどうかを検討したところ、各バンドは、制限酵素地図と一致しており、この遺伝子はゲノム当たり1つであることがわかった。また、CTF遺伝子の全エキソンの塩基配列および全エキソンミイントロン境界部位の塩基配列を決定した。以上より、この遺伝子は16個のエキソンからなり、約26kbの長さを持っていることが判明した。現在、CTF遺伝子の転写開始点の決定、および軟骨に誘導可能なマウスATDC5細胞などを用いたCATアッセイによる、CTF遺伝子のプロモーター活性の検討に着手しているところである。今後、この軟骨組織で特に大量に発現しているCTF遺伝子の上流解析を通して、軟骨特異的な転写調節を探究してゆく。

The gene expression of ATDC5 cells was determined by RT-PCR, and the gene expression of CTF was determined by PCR. In addition, CTF must be used to determine the structure of the computer. About 1 million CTF cDNA fragments were obtained from the genome of CTF. The total length of the protein is determined by the restriction enzyme digestion, the protein digestion, and the protein digestion. In addition, if you want to change the content of the website, you can change the content of the website. If you want to change the content of the website, you can change the content of the website. The base arrangement of the CTF gene is determined by the base arrangement of the CTF gene. The above is a 16-bit, 26-kb long file. Now, the determination of the starting point of CTF gene expression, the induction of cartilage, and the study of the activity of CTF gene expression in ATDC5 cells. In the future, a large number of cartilage tissues will be found in the CTF gene upstream analysis, cartilage-specific writing regulation to explore