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アルドステロン合成酵素遺伝子の発現制御

醛固酮合酶基因表达的调节

基本信息

批准号：
05770083
负责人：
河本健
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kochi Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

最近、我々はヒトのステロイド18水酸化酵素(P-450c18)とステロイド11beta水酸化酵素(P-45011beta)のcDNAをクローニングし、培養細胞で発現されてその酵素活性を明らかにした。これらはアミノ酸レベルでのホモロジーが93%と非常によくにており、酵素活性もかなりよくにていた。従って、アルドステロン合成の調節機構を解明するためには、これらの遺伝子の発現制御機構の違いや、これらが関係する代謝異常疾患について明らかにすることが重要である。P-450c18とP-45011beta遺伝子は、エクソンおよびイントロン部分で極めて高いホモロジーを持つのに対し、プロモーター領域では50%以下のホモロジーしか持たない。これらのプロモーター領域から一連の異なる長さの欠失変異体を作成してレポーター遺伝子の上流につなぎ、さまざまな細胞に入れてプロモーター活性について検討したところ、P-45011betaプロモーターは、副腎皮質由来のY-1細胞でのみcAMP依存的に発現し、一方、P-450c18プロモーターは、Y-1細胞でも非常に低い活性しか示さないことが判明した。現在、P-450c18の発現について、副腎皮質の初代培養細胞やアルドステロンを産生する細胞株であるNCI-H295を使用して検討中であるが、細胞の培養が難しい上に増殖速度も遅く、発現調節機構を調べるのはかなり困難な状況で、まだ良好な結果は得られていない。一方、P-450c18あるいはP-45011betaの欠損症ではないかと考えられる症例について、ゲノム遺伝子の解析を行ったところ、コルチコステロンメチルオキダーゼ(CMOI&II)欠損症ではP-450c18の遺伝子に、11beta水酸化酵素欠損症ではP-45011betaの遺伝子に変異があることが判明し、これらの欠損症の実態が明らかになった。

Recently, we have been able to detect the activity of the enzyme in cultured cells by cDNA sequencing of the enzymes P-450c18 and P-45011beta. The number of active substances in the medium is 93%. It is important to understand the regulatory mechanisms of metabolic disorders, such as metabolic disorders, metabolic disorders, and metabolic disorders. P-450c18 and P-45011beta transmitter are highly sensitive to changes in the range of 50% or less. The expression of cAMP-dependent protein in Y-1 cells derived from the adrenal cortex was detected by the up-flow detection of protein and protein in P-45011beta cells. Y-1 cells are very low in activity. Now, P-450c18 cell line was developed from primary culture of adrenal cortex cells. NCI-H295 cell line was used in the study. Cell culture was difficult, growth rate was high, regulation of development mechanism was difficult, and good results were obtained. P-450c18 deficiency syndrome P-45011beta deficiency syndrome P-450c18 deficiency syndrome P-45011 deficiency syndrome P-