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コンドロトランスフェリン遺伝子のクローニングと発現制御

软骨转铁蛋白基因的克隆及表达调控

基本信息

批准号：
09771537
负责人：
河本健
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771537/
关键词：
chondrotransferin melanotransferin p97 MTF cartilage chondrocyte

项目摘要

クローニングに成功したCTF遺伝子の転写開始点を決定するために、BALB/cマウス胎生17日胎児よりmRNAを抽出し、プライマー伸長法を行った。この結果、翻訳開始コドンATGから159bp上流の位置が転写開始点であることが判明した。さらに、5'上流領域を約2.5キロベースほどシークエンスし、塩基配列を決定した.その結果、CTF遺伝子にはTATAボックスは見出されず、GCボックス様配列、CAATTボックス様配列は存在していた。また、転写因子結合部位データベースでのホモロジー検索を行ったところ、CTF遺伝子の5'上流領域の配列では、AP1やSOX9といった転写因子の結合部位様配列およびCRE、オクタマ-といったコンセンスシークエンス様配列が見出された。これらのいずれかが調節エレメントとして機能し、CTF遺伝子の発現制御が行われている可能性が示唆された。また、軟骨に誘導可能なマウスATDC5細胞から2,6,10,14,18日にRNAを抽出し、RT-PCR法にてマウスコンドロトランスフェリン(CTF)の遺伝子発現を検討した。CTF遺伝子の発現パターンは同時に行った軟骨細胞の分化マーカーであるII型コラーゲン遺伝子と同様なパターンを示し、軟骨組織で特に大量発現しているCTFは、軟骨細胞の分化における新たなマーカーになるうることが示唆された。現在、軟骨に誘導可能なマウスATDC5細胞などを用いたルシュフェラーゼアッセイによる、CTF遺伝子のプロモーター活性の検討を試みているところである。今後、CTF遺伝子のさらなる上流解析を通して、軟骨特異的な転写調節を探求してゆく。

To determine the starting point of CTF gene expression, BALB/C gene expression was extracted from the fetus at day 17. As a result, the position of the start point of translation ATG is 159bp, and the position of the start point of translation ATG is 159bp The 5'upper field is about 2.5 cm long, and the base arrangement is determined. The results, CTF data, TATA data, GC data, CAATT data, etc. The combination site of the writing factor is arranged in the 5'upstream region of the CTF gene. The combination site of the AP1 and SOX9 is arranged in the CRE gene. The combination site of the writing factor is arranged in the CRE gene. The possibility of the occurrence of CTF gene is shown in the following table. RNA was extracted from ATDC5 cells at 2,6,10,14 and 18 days after induction, and gene expression was investigated by RT-PCR. The development of CTF gene and chondrocyte differentiation is simultaneous. The differentiation of chondrocytes is simultaneous. The differentiation of chondrocytes is simultaneous. The differentiation of chondrocytes is simultaneous. The differentiation of chondrocytes is simultaneous. Now, cartilage induction is possible in ATDC-5 cells, and the activity of CTF is investigated. In the future, CTF gene expression will be analyzed and cartilage specific gene regulation will be explored.