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成長板軟骨細胞におけるアルカリホスファターゼ遺伝子の発現制御

生长板软骨细胞碱性磷酸酶基因表达的调控

基本信息

批准号：
07771659
负责人：
河本健
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771659/
关键词：
軟骨軟骨細胞アルカリホスファターゼ遺伝子発現

项目摘要

ウサギの肋軟骨初代培養細胞系に最も適したDNA導入法を確立するために、pSV2CATを軟骨細胞にトランスフェクションしてCATアッセイを行って検討した。播種後1週間目と2週間目の軟骨初代培養細胞に、リン酸カルシウム法、DEAEデキストラン法、リポフェクチン法でトランスフェクションを行って比較したところ、トランスフェクションの効率は、DEAEデキストラン法、リポフェクチン法、リン酸カルシウム法の順に高かった。次に、ラットのアルカリホスファターゼ遺伝子プロモータをCAT遺伝子の上流に繁いだものを、pSV2CATでトランスフェクション効率が高かったDEAEデキストラン法とリポフェクチン法によって軟骨細胞にトランスフェクションした。しかし、pSV2CATとは異なり、アルカリホスファターゼ遺伝子ではきわめて低いプロモータ活性しか認められなかった。ちょうどこの頃、アルカリホスファターゼ遺伝子の発現調節に関する論文がJBCに発表され、この遺伝子の発現調節は転写レベルではほとんどなく、主に翻訳レベルで行われることが示された。このことから軟骨特異的な転写調節の研究を、アルカリホスファターゼ遺伝子をモデルとして行うことは不適当であり、新たなターゲットの開拓が必要であると考えられた。最近、われわれは軟骨の分化に伴って特異的に発現する76kDaの膜タンパク質の精製に成功した。そこで、この76kDaタンパク質を研究の新たなターゲットとし、その第一歩として76kDaタンパク質のcDANクローニングを試みた。RT-PCR法などを用いてクロニングを行った結果、ほぼ全長をカバーするcDNAクローンを得ることに成功し、その全塩基配列を決定した。データベース検索から、この76kDaタンパク質は、ヒトのメラノーマ細胞で発現しているメラノトランスフェリンと非常によく似た構造を持つことが判明した。ウサギの各臓器のRT-PCRを行ったところ、76kDaタンパク質のmRNAは軟骨組織で特異的に発現していることが明らかになった。そこで、このタンパク質をコンドロトランスフェリンと命名し、現在、ゲノム遺伝子のクローニングに着手していることろである。

The most suitable DNA introduction method for primary culture of costal cartilage cells was established. The cell culture rate of cartilage primary culture was compared between 1 week and 2 weeks after seeding with different methods, such as acid culture method, DEAE culture method, and depolymerization method. In addition, pSV2CAT has a higher efficiency than DEAE and pSV2CAT, which is used to detect soft bone cells. PSV2CAT is a very active and active tool. This paper is about the regulation of the development of JBC, the regulation of the development of JBC and the regulation of JBC. The study on the regulation of cartilage-specific gene expression is not appropriate, but necessary. Recently, cartilage differentiation was accompanied by the development of a 76kDa membrane protein purification process. The first step in the study of 76 kDa protein was to try out the protein. RT-PCR was used to determine the sequence of cDNA fragments, the length of cDNA fragments, and the sequence of DNA fragments. The 76kDa protein was identified by the protein and the protein was detected by the cell. The RT-PCR of each organ of the tumor was carried out in vitro, and the mRNA of 76kDa protein was found in cartilage tissue. The name of the name