破骨細胞の転写調節因子NF-κBによるインターロイキン6遺伝子発現機構の解析

破骨细胞转录因子NF-κB分析白细胞介素6基因表达机制

• 批准号: 08771621
• 负责人: 自見 英治郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771621/
• 关键词: 破骨細胞; インターロイキン(IL-1)-1; NF-κB; IL-6; ゲルシフトアッセイ; p50; p65; 免疫染色

マウス骨芽細胞と骨髄細胞の共存培養によって得られた破骨細胞様細胞(破骨細胞)を用いてインターロイキン6(IL-6)遺伝子の発現機構の解析を試みた。1.破骨細胞のNF-κB様因子の性状の解析ゲルシフトアッセイにおいて、IL-1によって活性化される破骨細胞のNF-κB様因子は骨芽細胞のNF-κBより分子量の小さな単一のバンドとして認められた。そこで、NF-κBを構成するp50,p65,c-Rel,Rel B及びp52に対する抗体を用いてスパーシフトアッセイを行い両者の組成の違いを検討した。その結果、骨芽細胞のNF-κBはp50-p50のホモダイマー、及びp50-p65のヘテロダイマーとして検出された。これに対し、破骨細胞のNF-κB様因子はp50に対する抗体でバンドの大部分が、p65に対する抗体でその一部がスーパーシフトしたが他のサブユニットに対する抗体には反応しなかった。このことから破骨細胞のNF-κB様因子はp50及びp65関連蛋白から構成されていることが判った。さらに、p65に対する抗体で免疫染色を行ったところ、IL-1刺激後30分で破骨細胞の全ての核にp65が移行することが判った。2.破骨細胞のIL-6mRNA発現の解析破骨細胞及び骨芽細胞をIL-1で刺激、非刺激した後に全RNAを抽出し、IL-6 cDNAプローブを用いてノーザンブロット法により破骨細胞と骨芽細胞のIL-6mRNA量を比較検討した。骨芽細胞ではIL-1刺激後1時間で非刺激の約10倍IL-6のmRNAの上昇が認められ、NF-κBの活性化を阻害するTPCKの前処理によってIL-6のmRNAの上昇は抑制された。一方、破骨細胞ではIL-6のmRNAの発現は検出限界以下であった。RT-PCR法で刺激後1時間でわずかな上昇が認められた。以上のことから、破骨細胞は骨芽細胞と同様にIL-1刺激によってNF-κBの核への移行が起こっているにもかかわらず、少なくとも破骨細胞が骨芽細胞よりも多くのIL-6を産生する可能性は低いと考えられた。

マ ウ ス bone と bud cells of bone marrow cells の coexistence cultivation に よ っ て have ら れ た osteoclast others in cells (osteoclast) を い て イ ン タ ー ロ イ キ ン 6 (IL - 6) heritage 伝 son の 発 institutions now の parsing を try み た. 1. Osteoclasts の nf-kappa B others factor の traits の parsing ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ に お い て, IL - 1 に よ っ て activeness さ れ る osteoclast の nf-kappa B others factors は bone bud cell の nf-kappa B よ り の small molecular weight さ な 単 a の バ ン ド と し て recognize め ら れ た. そ こ で, nf-kappa B を す る p50 and p65, c - Rel, Rel B and び p52 に す seaborne を る antibody with い て ス パ ー シ フ ト ア ッ セ イ を line い struck is の composition の violations い を beg し 検 た. そ の results, bone bud cells の nf-kappa B は p50 - p50 の ホ モ ダ イ マ ー and び p50 - p65 の ヘ テ ロ ダ イ マ ー と し て 検 out さ れ た. こ れ に し seaborne, osteoclast の nf-kappa B others factor は p50 に す seaborne る antibody で バ ン ド の most が and p65 に す seaborne る antibody で そ の a が ス ー パ ー シ フ ト し た が he の サ ブ ユ ニ ッ ト に す seaborne る antibody に は anti 応 し な か っ た. <s:1> <s:1> と ら ら osteoclast <s:1> NF-κ B-like factor <s:1> p50 and びp65 associated protein ら ら constitute されて る る る とが とが った った った った ら ら ら ら ら った った った った とが とが とが った った った った った った とが とが った った った った った った ら ら ら とが とが った った. さ ら に, p65 に す seaborne で る antibody immune dyeing line を っ た と こ ろ, IL - 1 stimulation after 30 で osteoclast の full て の nuclear に p65 が transitional す る こ と が convicted っ た. 2. Osteoclasts の IL - 6 mrna 発 is の parsing osteoclast を び bone bud cells and IL - 1 で stimulation, the stimulation し た に after total RNA を drew し, IL - 6 cDNA プ ロ ー ブ を with い て ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ り osteoclast と bone bud cells の IL - 6 mrna quantity beg し を compare 検 た. Stimulate bone bud cells で は IL - 1 で 1 time after the stimulation の is about 10 times the IL - 6 の mRNA の rise が recognize め ら れ, nf-kappa B の activeness を resistance against す る TPCK の 処 before Richard に よ っ て IL - 6 の mRNA の rise は restrain さ れ た. One side, osteoclasts で 検 IL-6 <s:1> mRNA <e:1> present 検 検 検 below the limit であった. One time after で stimulation by RT-PCR, でわず な な rose が to められた. Above の こ と か ら, osteoclast は と bud cells with others in bone に IL - 1 stimulate に よ っ て nf-kappa B の nuclear へ の transitional が up こ っ て い る に も か か わ ら ず, less な く と も osteoclast が bone bud cells よ り も more く の IL - 6 を produce す る は unlikely い と exam え ら れ た.

项目成果

Jimi,E.: "Interleukin-1α activates an NF-κB-like factor in osteoclast-like cells." J. Biol. Chem.271. 4605-4608 (1996)

Jimi, E.：“Interleukin-1α 激活破骨细胞样细胞中的 NF-κB 样因子。”J. Biol.271 4605-4608 (1996)。