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Analysis of new regulatory mechanism of protein deamidation and it's functional using oral cancer cells

蛋白质脱酰胺新调控机制及其在口腔癌细胞中的功能分析

基本信息

批准号：
21K19609
负责人：
自見英治郎
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19609/
关键词：
脱アミド化口腔扁平上皮癌 NF-κB NF-kB

项目摘要

タンパク質の機能は、立体構造の変化によって調節される。特定アミノ酸残基のリン酸化やアセチル化、アミド化などの翻訳後修飾は、重要なタンパク質の機能調節系である。タンパク質のアミド基を取り除く脱アミド化反応は、長い間、徐々に進行する酵素に依存しない「化」と考えられてきた。しかし、ある種の免疫系タンパク質の短時間に起こる脱アミド化が、がん細胞や微生物による免疫回避に重要な役割を果たす、という新たなモデルが提唱された。近年、転写因子NF-κBのメインサブユニットであるp65の64番目および139番目のアスパラギン（N）が脱アミド化（アスパラギン酸へ変異：D）することが報告されたが、その機能は不明な点が多い。まず、p65の脱アミド化部位（N64D, N139D）を含むペプチドを抗原として、脱アミド化p65 を特異的に認識する抗体を作製した。N64Dに対する抗体は特異性が著しく低く作製できなかったが、N139Dに対する抗体を得ることができた。しかし、N139Dだけでなく野生型p65も認識してしまうので、現在抗体の希釈濃度を検討中である。FLAG TagおよびGFPを融合したp65変異体（N64D, N139D, および2つの変異を持つDD）を作製して転写活性を調べた。N64Dは野生型と殆ど変化しなかったが、N139Dは転写活性が40%まで低下した。DDは転写活性が25%まで低下したが、DD変異体の発現そのものが著しく低下しており、DDの転写活性の低下は発現量の低下に起因すると考えられた。現在、２種類のマウスがん細胞（SCCVII細胞、およびB16細胞）の内在性のp65をゲノム編集でノックアウトし、野生型およびp65変異体を恒常的に発現する細胞株を樹立中である。

It is necessary to use the mechanical and stereoscopic equipment to improve the performance of the machine. Specific acid residues, acid In order to improve the performance of the enzyme-dependent system, the enzyme dependence test is carried out in the laboratory. A variety of immune systems will be activated in a short period of time, cell microorganisms will be immune to immune avoidance, important services will be cut, and new products will be raised. In recent years, the writing factor NF-