歯周組織の再生におけるアルカリホスファターゼ陽性線維芽細胞の機能解析

碱性磷酸酶阳性成纤维细胞在牙周组织再生中的功能分析

• 批准号: 08771703
• 负责人: 安部 達也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771703/
• 关键词: 線維芽細胞; アルカリホスファターゼ; 歯肉; 歯周炎

1、アルカリホスファターゼ(ALP)陽性歯肉線維芽細胞の選択的分離。成人性歯周炎患者10名から歯肉を採取し、段階的酵素消化法、沈降法および付着法の組み合わせにより線維芽細胞を分離した。酵素染色と免疫染色による観察結果、分離した細胞の71.9±%7.1%がALP陽性線維芽細胞であった。マクロファージ/単球の混入は2-4%で、血管内皮細胞の混入は認められなかった。今後、抗ALP抗体を作製してALP陽性線維芽細胞をさらにpurificationする予定である。2、ALP陽性線維芽細胞のin vitro解析。(1)増殖能の解析:分離した線維芽細胞を10%fetal bovine serum(FBS)存在下で継代培養するとALP陽性細胞の比率が低下した。10%FBS存在下で細胞周期のS期の細胞の割合をbromodeoxyuridine(BrdU)の取り込みにより測定した結果、ALP陽性細胞のBrdU標識率はALP陰性細胞のそれに比べ有意に低かった(10.1±2.9%vs.39.1±4.1%,n=5)。(2)コラーゲン産生能:ヒトtype I procollagenに対するモノクローナル抗体で免疫染色した結果、その陽性率はALP陽性細胞と陰性細胞とで同程度であった(85.4±3.7%vs.86.7±4.8%,n=5)。以上の結果から、成人性歯周炎患者の歯肉炎症巣に存在するALP陽性線維芽細胞は、増殖能は低いがコラーゲン産生能は保持されており、炎症反応部位における結合組織の修復に重要な関連性があることが推察された。

1. Isolation of selected cells from the ALP positive dentin thread. 10 adult patients with periodontitis were treated with enzyme digestion, sedimentation, and combination of methods to isolate vascular cells. 71.9± 7.1% of cells isolated by enzyme staining and immunostaining were ALP-positive. 2-4%, vascular endothelial cells mixed In the future, anti-ALP antibodies will be produced in ALP-positive cells. 2, ALP positive line of cell in vitro analysis. (1)Analysis of proliferation ability: In the presence of 10% fetal bovine serum(FBS), the percentage of ALP-positive cells in cultured cells decreased. In the presence of 10% FBS, the percentage of BrdU in ALP positive cells was significantly lower than that in ALP negative cells (10.1± 2.9% vs. 39.1 ±4.1%,n=5). (2)The positive rate of ALP positive cells was the same as that of ALP negative cells (85.4±3.7%vs.86.7±4.8%,n=5). The above results suggest that ALP-positive thread-like germ cells exist in the inflammatory pulp of adult patients with periodontitis, but their reproductive energy is low and their production energy is maintained. This suggests that they are important in the repair of combined tissues at the site of inflammatory reaction.