歯の再生を目指したヒト乳歯歯髄幹細胞濃縮と機能解析

人乳牙牙髓干细胞富集及牙齿再生功能分析

• 批准号: 21K10165
• 负责人: 稲田 絵美
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10165/
• 关键词: 乳歯歯髄幹細胞; 細胞工学的手法; アルカリホスファターゼ; 多能性幹細胞

申請者らの過去の研究から「アルカリフォスファターゼ（ALP）高活性かつOCT-3/4陽性の細胞（以下、ALP(+)/OCT-3/4(+)と表記）は多能性幹細胞になり得る」と判断された。本研究では、細胞工学的手法によるHDDPC（ヒト乳歯由来歯髄細胞）由来ALP(+)/OCT-3/4(+)安定株樹立を目指す。同細胞の特性を解析する一方、マウス胎仔の歯槽堤部由来細胞との共培養による組織再構成実験を行い、当該細胞の機能性（多能性幹細胞の特性を有する細胞か否か）を明らかにする。2021年度では、限界希釈法でHDDPCをsingle cell化した後、増殖させる試みを行ったが、維持・増殖が進まない状況にあった。そこで、わずかに増殖した各細胞からmRNAを回収し、遺伝子発現解析が可能な全トランスクリプトーム増幅法（WTA）を用い、幹細胞特異的遺伝子の発現をRT-PCR法にて調べた。その結果、cell cloneによってはALP等の幹細胞特異的遺伝子の発現様式が異なることが判った。2022年度では、細胞の器官培養の適正条件について検討した。細胞増殖の足場となるscaffold にはvitroGel（TheWell）とMatrigel（Corning）を採用し、EGFP蛍光発現マウスB16 melanoma細胞を培養した。その結果、vitroGelではB16 melanoma細胞がscaffold周辺部に拡がったが、Matrigelではscaffold内部での増殖・拡大が認められたことから、Matrigel はin vitroでの細胞の3D構造構築に最適な素材ではないかと判断された。また、Matrigelを用いてiPS細胞からの三胚葉性分化細胞への分化誘導を検討したところ、その程度は低いものの分化誘導ができる可能性が示唆された。

The applicant's past research has determined that "cells with high activity (ALP) and OCT-3/4 positive cells (ALP(+)/OCT-3/4(+)) are pluripotent stem cells." The aim of this study was to establish HDDPC cells derived from ALP(+)/OCT-3/4(+) stable strains by cytoengineering methods. To analyze the characteristics of the same cells, to determine whether the tissue reconstitution of the cells derived from the dental cavity of the fetus is in progress, and to determine the functionality of the cells (whether the characteristics of pluripotent stem cells are present or not) In 2021, the HDPC single cell transformation and propagation were tested, maintained and propagated. The expression of mRNA in each cell was detected by RT-PCR, and the expression of mRNA was analyzed by WTA. The expression patterns of stem cell-specific genes such as ALP and cell clone are different. In 2022, the optimal conditions for cell and organ culture were discussed. Cell proliferation and growth of B16 melanoma cells using EGFP light The results, vitroGel, B16 melanoma cells, scaffold perimeter, Matrigel, scaffold interior, growth, recognition, Matrigel in vitro, cell 3D architecture, optimal material, judgment, etc. The possibility of inducing differentiation of triblast-differentiated iPS cells with Matrigel was discussed.

项目成果

Electroporation-Based Non-Viral Gene Delivery to Adipose Tissue in Mice

基于电穿孔的非病毒基因递送至小鼠脂肪组织

• DOI: 10.21926/obm.genet.2202151
• 发表时间: 2022
• 期刊: OBM Genetics
• 作者: Masahiro Sato;Issei Saitoh;Yuki Kiyokawa;Eri Akasaka;Shingo Nakamura;Satoshi Watanabe;Emi Inada
• 通讯作者: Emi Inada

Recent advances in in vivo genome editing targeting mammalian preimplantation embryos.

针对哺乳动物植入前胚胎的体内基因组编辑的最新进展。

• DOI: 10.5772/intechopen.106873
• 发表时间: 2023
• 期刊: InTechOpen
• 作者: Sato M;Ohtsuka M;Inada E;Nakamura S;Saitoh I;Takabayashi S
• 通讯作者: Takabayashi S

Cytoplasmic microinjection of piggyBac transposase mRNA and transposon vectors for efficient in vitro production of transgenic porcine parthenotes.

PiggyBac 转座酶 mRNA 和转座子载体的细胞质显微注射可有效体外生产转基因猪单性动物。

• DOI: 10.21926/obm.genet.2203166
• 发表时间: 2022
• 期刊: OBM Genetics
• 作者: Miyagasako R;Hansol J;Watanabe S;Miyoshi K;Inada E;Sato M
• 通讯作者: Sato M

RNA analysis based on a small number of manually isolated fixed cells (RNA-snMIFxC) to profile stem cells from human deciduous tooth-derived dental pulp cells.

• DOI: 10.1186/s12575-021-00149-5
• 发表时间: 2021-06-11
• 期刊: Biological procedures online
• 影响因子: 6.4
• 作者: Inada E;Saitoh I;Kubota N;Iwase Y;Kiyokawa Y;Noguchi H;Yamasaki Y;Sato M
• 通讯作者: Sato M

糖尿病患児由来乳歯歯髄細胞を用いた膵臓特異的幹細胞（T1D-iTSC-P）の樹立

利用糖尿病儿童乳牙牙髓细胞建立胰腺特异性干细胞（T1D-iTSC-P）

• 发表时间: 2022
• 作者: Sakai-Yonaha Mayuko;Miyagi-Shiohira Chika;Kuwae Kazuho;Tamaki Yoshihito;Nishime Kai;Yonaha Tasuku;Saitoh Issei;Watanabe Masami;Noguchi Hirofumi;Hiroshi Egusa;清川裕貴，稲田絵美，井葉野夏実，安村真一，岡野 哲，岩瀬陽子，早﨑治明，齊藤一誠
• 通讯作者: 清川裕貴，稲田絵美，井葉野夏実，安村真一，岡野 哲，岩瀬陽子，早﨑治明，齊藤一誠