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インターロイキン1レセプター発現調節機構の解析

白细胞介素1受体表达调控机制分析

基本信息

批准号：
08772101
负责人：
瀧井猛将
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的はインターロイキン1レセプター(IL-1R)の発現調節機構を明らかにすることである。そこで、本研究ではIL-1Rの発現変化をin vitro、及び、in vivoの両面から検討した。In vitroの実験では、ヒト線維芽細胞株TIG-1にチロシンキナーゼの阻害剤であるゲニステインで処理すると、^<125>IラベルしたIL-1の結合をゲニステインは用量依存的、また、経時的にも抑制した。スキャッチャードプロット解析の結果、ゲニステインはIL-1Rの親和性を変えることなく、細胞表面上のレセプター分子を減少させていた。また、ゲニステイン前処理により、細胞表面上のIL-1R分子を減少させておくと、IL-1誘導インターロイキン6(1L-6)の産生が抑制された。これらのことから、恒常的なIL-1Rの発現にはチロシンキナーゼが関与していることが、本研究で初めて明らかとなった。しかし、ゲニステインはIL-1R mRNAの発現を抑制しなっかったことから、ゲニステインは転写後の調節に働いていることが示唆された。更に、蛋白合成阻害剤であるサイクロヘキシミド存在下でもゲニステインの作用が認められたことから、ゲニステインは翻訳過程以後に作用していることが示唆された。In vivoの実験では、グラム陰性菌のエンドトキシンであるリポ多糖(LPS)投与マウスの肝臓でIL-1R mRNAの発現が上昇していることが、in situハイブリダイゼイション、及び、rverse-transcriptase chain reaction (RT-PCR)法により明らかとなった。LPSにより誘導されるサイトカイン類(IL-1,IL-6,TNF(腫瘍壊死因子))を投与して調べた結果、IL-1,IL-6,TNFいずれもIL-1R mRNAの発現が誘導されたことから、in vivoにおいてはこれらサイトカインのネットワークによりIL-1R mRNAの発現が調節されており、IL-1の反応性が上昇していることが示唆された。肝臓はLPSにより誘導されるサイトカインにより急性期蛋白を作ることが知られているが、IL-1Rの発現の上昇もこの作用に関与しているのかもしれない。更に詳しく単離した初代培養肝細胞を用いて検討した。LPSで誘導されるサイトカイン類(IL-1,IL-6)、及び、LPS投与マウスの血清でもIL-1R mRNAが誘導されたが、TNFでは誘導されなかった。しかし、in vivoではTNFはIL-1やIL-6を誘導することから、TNF投与による肝臓でのIL-1R mRNAの発現増強はこれらのサイトカインによるものかもしれない。

The purpose of this study is to clarify the mechanism of development and regulation of IL-1R In this study, IL-1R expression in vitro and in vivo was investigated. In vitro, the inhibitory agent of interleukin-1 in the mitochondrial germ cell line TIG-1 can be treated with interleukin-1, and the binding of interleukin<125>-1 to interleukin-1 is inhibited in a dose-dependent, time-dependent manner. The results of the analysis of IL-1R on the cell surface show that the affinity of IL-1R on the cell surface is reduced. IL-1R molecules on the cell surface were reduced and IL-1-induced production of IL-6(1L-6) was inhibited. This study is preliminary to the discovery of IL-1R. The expression of IL-1R mRNA is inhibited by the expression of IL-1R mRNA, which is regulated by the expression of IL-1R mRNA. In addition, the protein synthesis inhibitor can be used to inhibit the protein synthesis in the presence of protein. IL-1R mRNA expression increased when LPS was administered to the liver in vivo, and was detected by rverse-transcriptase chain reaction (RT-PCR). IL-1,IL-6,TNF(tumor necrosis factor) were induced by LPS, IL-1, IL-6,TNF mRNA expression was induced in vivo, IL-1R mRNA expression was regulated in vivo, IL-1 reactivity was increased in vivo. The role of LPS in the induction of acute phase proteins is related to the rise of IL-1R. In addition, primary cultured hepatocytes were used for further research. LPS induced IL-1,IL-6, IL-1R mRNA and TNF induced IL-1,IL-6, IL-1R mRNA in serum. TNF induces IL-1 and IL-6 in vivo, and IL-1R mRNA expression increases in vivo.