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結核菌の生菌特異的な宿主細胞傷害活性の発現機構の解析と関連因子の探索

结核分枝杆菌活菌特异性宿主细胞毒活性表达机制分析及相关因素探寻

基本信息

批准号：
20K07125
负责人：
瀧井猛将
金额：
$ 2.75万
依托单位：
公益財団法人結核予防会結核研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト型結核菌Mycobacterium tuberculosis と種々のヒト由来細胞株を共培養すると生菌特異的に宿主細胞死が誘導される細胞株（A549;肺上皮細胞、MRC-5;肺線維芽細胞）があることを見出している(J Interferon Cytokine Res., 2001)。この細胞死は生菌特的であること、日和見感染を起こすトリ型結核菌M. aviumや結核ワクチン株であるM. bovis BCG菌では弱いことから抗酸菌の病原性との関連が示唆された。昨年度までに結核菌の取り込みについて透過型電子顕微鏡での観察から、菌の取り込みと細胞死は経時間的に一致していることを明らかにしている。また遺伝子発現解析やELISAでのタンパク質測定から炎症性のサイトカインであるIL-6やIL-8の発現も細胞死と経時間的に一致していること明らかにしている。本年度は、結核菌による宿主細胞傷害活性をリアルタイムで測定可能な細胞傷害活性測定装置をもちいて詳細に解析を行ったところ、細胞傷害活性は結核菌感染後20時間前後から観察された。この結果は以前に報告した(Antimicrob. Agents Chemmother., 2002)染色法での結果では1日目以降に細胞傷害活性が見られる結果と相関が見られた。また、抗菌薬を用いた検証で、細胞傷害活性が生菌数に比例していること確認できた。これらのことから、本測定系は、結核菌生菌による細胞傷害活性の詳細な機構解明に有用であることが示された。

A co-culture of Mycobacterium tuberculosis and its origin cell lines and a culture of bacteria-specific host cell lines (A549; lung epithelial cells, MRC-5; lung germ cells) was performed. 2001)。M. tuberculosis is the most common form of M. tuberculosis. avium M. Bovis BCG bacteria are weak, and the pathogenicity of acid-resistant bacteria is related. In the past year, the detection of tuberculosis by transmission electron microscope was carried out. The detection of tuberculosis by transmission electron microscope was carried out in the same way as that of cell death time. The expression of IL-6 and IL-8 was determined by ELISA and the time of cell death was determined by ELISA. This year, the host cell injury activity of tuberculosis was measured by the assay device. The assay device was used to analyze the host cell injury activity in detail. The host cell injury activity was observed 20 hours after tuberculosis infection. This result is reported previously (Antimicrob. Agents Chemmother., 2002)The results of the staining method were compared with those of the control method. The ratio of cell injury activity to the number of bacteria in the culture was confirmed. This assay is a useful tool for explaining the detailed mechanism of cellular injury activity of Mycobacterium tuberculosis.