抗酸化PC抗体を用いたLDLの酸化変性と泡沫細胞内酸化LDL代謝の解析

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抗酸化LDLモノクローナル抗体DLH3は、アルデヒド基を含む9CHO-PCなどのPCの過酸化反応生成物をエプトープとし、免疫組織化学で病巣内のマクロファージ由来の泡沫細胞を顕著に染色する。また、この抗体を用いた酸化LDLの高感度定量法により腎透析患者血漿LDL酸化レベルが健常者の約8倍であることをすでに見出している。さらに今年度は、(1)低HDL血症を呈する遺伝性疾患であるLCAT欠損症患者の血漿LDL酸化レベルが健常者の約3.5倍であることを見出した。LCATに酸化PCを代謝する活性のあることも見出し、LCATが血漿LDL酸化変性防御因子としての役割のあることが示唆された。(2)DLH3と同様にヒト粥状硬化病巣ホモジェネートを免疫源として作製したモノクローナル抗体DLH2が、架橋蛋白質を認識することを確かめた。ヒト動脈硬化病巣をこのDLH2抗体で免疫染色すると、泡沫化したマクロファージおよびその周囲の細胞外マトリックスが陽性となり、病巣中に架橋変性を受けた蛋白質が存在することが示唆された。(3)J774マクロファージ細胞に、未処理LDL、アセチルLDL、酸化LDLを1時間取り込ませた後、細胞内での各LDLの残存量の経時変化をヒトアポBに対するサンドイッチELISAで調べた。LDLとアセチルLDLは速やかに減少(半減期30分)した。酸化LDLは半減期約90分と少し代謝速度は遅かったが、24時間後にはほとんど細部内から消失した。酸化LDLもマクロファージに取り込まれた後に完全に代謝されるのか、さらに検討中である。(4)J774マクロファージ細胞にリポ蛋白質除去血清存在下でスフィンゴンシンを加えて24時間培養すると、DLH3の免疫染色陽性になることが見いだされた。何らかの細胞刺激に伴って、おそらくリポ蛋白質には依らず、細胞膜リン脂質の酸化変性が起こりうる可能性が考えられた。現在、この様な変化を起こす条件、細胞の種類、生じた抗原の性質などを検討中である。