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抗酸化LDLモノクローナル抗体を用いた泡沫細胞内酸化LDLの代謝様式の解析

利用抗氧化LDL单克隆抗体分析泡沫细胞中氧化LDL的代谢模式

基本信息

批准号：
06772149
负责人：
板部洋之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト動脈硬化病巣ホモジェネートを感作抗原として得た、抗酸化LDLモノクローナル抗体FOH1a/DLH3が次のような特徴を有することを昨年までの研究で明らかにしている。(1)未処理LDL、アセチル化LDL、マロンジアルデヒド化LDLいずれの本抗体とは反応しないが、LDLもHDLも硫酸銅処理で酸化すると良い抗原となる。(2)ヒト動脈硬化病巣の免疫組織化学で病巣内のマクロファージ由来の泡沫細胞が顕著に染色された。(3)本抗体のエピトープはホスファチジルコリンの過酸化反応生成物であり、これは蛋白質やペプチドと複合体を形成しうる。酸化LDL上ではおそらく共有結合で結びついたものと、リポタンパク粒子内に埋まり込んだものとが共存していると考えられる。本年度は、この抗体を用いた酸化LDLの高感度定量法を確立した。DLH3抗体をあらかじめコートしたELISAプレートに酸化LDLを添加し、結合した量を抗ヒトアポB抗体で定量する。サンドイッチ法を用いたことで夾雑物質の影響を受けにくくなり、また感度が向上し0.5〜10ngの酸化LDLが測定できるようになった。種々測定条件を検討し、分離したヒト血漿LDL画分中の酸化LDL量を初めて測定できるようになった。本法で測定した健常人血漿LDL中の酸化LDL値は0.18±0.09(ng/μg LDL protein)であった。これまで血管壁内で浸潤したLDLの酸化的変性が起こるため血漿中には酸化LDLが見られないと考えられてきたが、酸化LDL血管内でも生成しうる可能性も再検討すべきであろう。糸球体腎炎で過酸化脂質が増加し糸球体に泡沫細胞が生じることや、腎不全ではしばしば動脈硬化症を併発することが知られている。そこで腎透析患者血漿LDLの酸化LDL値を測定したところ、1.14±0.72(ng/μg LDL protein)と健常者の約6倍であることが見いだされた。このことから、LDLの酸化的修飾が腎臓病に伴う血管障害と関連している可能性が示唆された。

The study conducted last year showed that FOH1a/DLH3 was a sensitive antigen for atherosclerosis and an anti-acidified LDL antibody. (1)Untreated LDL, unacidified LDL (2)Immunohistochemical examination of the origin of foam cells in patients with atherosclerosis (3)The antibody is a protein complex. Acidified LDL has a common bond, a complex bond, a complex bond, and a complex bond. This year, the antibody was established using a highly sensitive quantitative method for acidified LDL. DLH3 antibody was added to the ELISA and the amount of anti-LDL antibody was quantified The sensitivity of the sample to the presence of a substance is 0.5 to 10ng. The determination conditions were discussed, and the amount of acidified LDL in plasma LDL fractions was determined. This method was used to determine the acidified LDL in healthy people's plasma, which was 0.18±0.09 ng/μg LDL protein. The possibility of LDL acidification in the blood vessel wall is discussed. Spheroid glomerulonephritis is characterized by increased levels of hyperacidified lipids and the development of foam cells in glomerulonephritis. The plasma LDL and LDL acidified value of renal dialysis patients were determined to be 1.14±0.72(ng/μg LDL protein), which was about 6 times higher than that of normal patients. The possibility of LDL acidification modification associated with renal disease and vascular damage is also discussed.