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核内受容体転写制御に関わる新規共役因子の同定及び解析

核受体转录调控中涉及的新型耦合因子的鉴定和分析

基本信息

批准号：
08780581
负责人：
今井剛
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780581/
关键词：
転写核内受容体共役因子ビタミンD カルシウム EF-ハンド

项目摘要

(1)ビタミンD受容体(VDR)とVAF1の結合酵母two-hybrid systemを用いて単離したVDRと結合する因子VAF1は、細胞内結合実験(酵母内two-hybrid法)及び試験管内結合実験(GST pull-down法、Far-western法)においても結合を確認することができた。また、VAF1欠損変異株を用いVAF1上の結合部位を解析すると、カルシウム結合部位として知られるEF-hand motifをVDRは認識・結合することを明らかにした。その結合はカルシウムにより阻害を受けた。また、VDR欠損変異株を用いた結合実験よりVAF1はVDRのDからE領域を認識・結合した。以上結合実験の結果より従来知られていた転写共役因子とは異なることが明らかとなった。第一に核内受容体スーパーファミリーの中でVDR特異的に結合することであり、第二にリガンド結合中心部位と異なる部位(VDRのDからE領域)に結合する。最後にリガンド非依存的に結合する点である。(2)VDRとEF-hand motifの結合さらに、他のEF-hand motifをもつ三種類のタンパク質ともEF-hand motifを介してVDRは認識・結合した。また、同結合も、カルシウムにより阻害を受けた。(3)VDR転写共役因子の同定・解析以上より、VDRはEF-hand motifを認識・結合するため、3種のEF-hand motifを有するタンパク質について転写共役活性をレポーター遺伝子トランスフェクション法を用いて解析を行ったところ、核内EF-hand motif、ロイシンジッパーを持つ二つのタンパク質がVDR転写共役活性を有することを明らかにした。また、他の転写共役因子と同様、転写共役因子CBPと結合した。よって、二因子は新規転写共役因子であると考えられる(以上投稿中)。

(1)The yeast two-hybrid system of VDR and VAF1 was used to confirm the binding between VDR and VAF1, intracellular binding (yeast two-hybrid method) and in vitro binding (GST pull-down method, Far-western method). The binding site on VAF1 was analyzed and identified. The binding site on VAF1 was identified and identified. The combination of the two is not easy. The VDR is not suitable for use in combination with VAF1. The above results are combined to know the common service factor. The first nuclear receptor is the VDR specific binding site, and the second nuclear receptor is the VDR binding site. Finally, the independent combination point (2) The combination of VDR and EF-hand motif, and the combination of VDR and EF-hand motif. It is difficult to prevent damage caused by the same combination of factors. (3) The identification and analysis of VDR's co-operative factors. The identification and analysis of VDR's co-operative factors are as follows: VDR's EF-hand motif has three kinds of EF-hand motifs, and the analysis of VDR's co-operative activity has two kinds of EF-hand motifs, and the analysis of VDR's co-operative activity has two kinds of EF-hand motifs. Co-operative factors, co-operative factors, co-operative factors,よって、二因子は新规転写共役因子であると考えられる(以上投稿中)。