テロメラーゼ構成遺伝子群の同定及び精製

端粒酶组成基因的鉴定和纯化

• 批准号: 05780434
• 负责人: 今井 剛
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780434/
• 关键词: テロメラーゼ; テロメア; DNA固定化アフィニティラテックス粒子

テロメラーゼ構成遺伝子群の精製を行なうにあたり、実験材科としてヒトの細胞株であるHeLa細胞を用いた。HeLa細胞よりDignamらの方法を用いて粗核抽出液及び粗細胞質抽出液を作製し、テロメアDNA配列をもつ合成オリゴヌクレオチド及び基質を反応させた。その結果、全テロメアDNA伸長活性(テロメラーゼ活性)のうち約80%が粗細胞質抽出液中に検出された。そのため、粗細胞質抽出液を精製出発材料としてテロメラーゼ構成遺伝子群の精製及び単離を行なっている。しかし、テロメラーゼ構成遺伝子群は、RNAと複数のタンパク質の複合体であると推測されており、精製が困難であると考えられた。そのため、精製方法は、高効率で迅速に行なえるものでなければならない。そこで、当研究室で開発されたDNA固定化アフィニティラテックス粒子を用いてHeLa細胞粗細胞質抽出液よりテロメラーゼ構成遺伝子群の精製を試みた。しかし、テロメラーゼ構成遺伝子群が失活してしまい精製が行なえなかった。また、テロメラーゼ構成遺伝子群の特性ついても解析を行なっている。その結果、熱(60度5分間)、硫酸アンモニウム沈殿、proteinase及びRNaseに感受性があることか判明した。即ち、テロメラーゼ構成遺伝子群は、タンパク質及びRNAを含むことが明かとなった。現在、以下の三点を中心に研究を行なっている。第一に新たなDNA固定化アフィニティラテックス粒子の作製である。第二に、粗細胞質抽出液とDNA固定化アフィニティラテックス粒子の結合反応の条件設定の変更である。第三に出発材料の粗細胞質抽出液を他のカラムクロマトグラフィーで一度分画してからDNA固定化アフィニティラテックス粒子による精製に用いる。

The cell lines of HeLa cells are used in the purification of DNA. HeLa cells were prepared by using crude nuclear extract and crude cytoplasmic extract, and DNA sequencing was performed. As a result, the DNA elongation activity of the whole cell was about 80%, and it was detected in the crude cytoplasmic extract. The purification and separation of crude cytoplasmic extract from crude cytoplasmic extract The complex of RNA and DNA is difficult to refine. The method of refining and refining is very efficient and fast. In this paper, the author tries to develop DNA immobilization and purification of HeLa cells by using crude cytoplasmic extract. This is the first time I've ever been able to do this. The characteristics of the genetic subgroup are analyzed. Results, heat (60 degrees 5 minutes), sulfuric acid, protease and RNase sensitivity That is to say, it constitutes a genetic group, a genetic group and a genetic group. Now, the following three points are the center of research. The first is the preparation of immobilized DNA particles. Second, the crude cytoplasm extract and DNA immobilization conditions for particle binding were changed. Third, the crude cytoplasmic extract of the derived material is used in the purification of DNA immobilization particles.

项目成果

Dongmin Ma et al: "Isolation of a cDNA encoding the largest subunit of TFIIA reveals functions important for activated transcription" GENES & DEVELOPMENT. 7. 2246-2257 (1993)

Dongmin Ma 等人：“编码 TFIIA 最大亚基的 cDNA 的分离揭示了激活转录的重要功能” GENES

Shin Aizawa et al: "Hemopoietic supportive function of established human bone marrow stromal cell lines by introduction with recombinant adeno-virus vectors" Experimental Hematology. 22 (印刷中). (1994)

Shin Aizawa 等人：“通过引入重组腺病毒载体建立的人骨髓基质细胞系的造血支持功能”实验血液学 22（出版中）。