ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子mRNA分解制御機構の解析

尿激酶型纤溶酶原激活物mRNA降解调控机制分析

• 批准号: 08780662
• 负责人: 若尾 りか
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780662/
• 关键词: mRNA; プラスミノーゲン活性化因子; AU-リッチ因子; hnRNP C; p38; MAP kinase; mRNAの分解制御

MDA231細胞でのuPAのmRNA安定化機構の解析ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子(uPA)のmRNAはヒト乳ガン細胞MDA231で8時間という長い半減期を示す。一方、ブタ上皮細胞LLC-PK1では同じmRNAが30分という短い半減期を示す。グロビン遺伝子の3'非翻訳領域にuPA mRNAの3'非翻訳領域を接続したレポーター遺伝子のmRNAの安定性の解析から、MDA231細胞ではAU-rich element(ARE)が不安定性に寄与しないことが明らかになった。AREは癌遺伝子やリンホカインのmRNAの3'非翻訳領域にあり、これらのmRNAを不安定化することが知られ、またLLC-PK1においても、uPA mRNAを不安定化することをすでにわれわれは報告した。我々はAREに特異的に結合する40kDaの細胞質蛋白(p40)を同定した。p40の発現レベルはMDA231では高くLLC-PK1では低かった。さらにLLC-PK1細胞にPKC-down-regulationをおこすと内在性uPAのmRNAが安定化するが、この条件下でp40の発現レベルが上昇することがわかった。細胞質画分をhnRNP Cに対するモノクローナル抗体で前処理するとp40の結合活性が著しく低下することから、p40はhnRNPC自体か関係する蛋白であること、AREを介した分解からmRNAを守っていることが示唆された。細胞質画分をアルカリホスファターゼで処理するとp40の結合活性は強く阻害される。細胞に対しp38 MAP kinaseの特異的な阻害剤を投与すると、AREを3'非翻訳領域に接続したグロビンmRNAは劇的に分解が促進される。従ってAREを介したmRNA分解はp38 MAP kinaseが関るシグナル伝達の経路にあることが示唆された。

Analysis of the RNA stabilization mechanism of uPA in MDA231 cells and the type of RNA activity The time and half-life of uPA in MDA231 cells of human breast cancer cells are shown in the figure. On the one hand, the epithelial cell LLC-PK1 is the same as the 30-minute mRNA and the short half-period is shown.グロビン伝子の3' Non-translation domain にuPA mRNA の3' Non-translation domain をConnection 続したレポーター 缝子のmRNAのStability のanalysis から、MDA231 cells AU-rich element(ARE) is not stable and stable. AREはcancer legacy㼝子やリンホカインのmRNAの3'non-translation fieldにあり、これらのすることが知られ, またLLC-PK1 においても, uPA Report on the instability of mRNA. Our ARE specifically binds to the 40kDa cytoplasmic protein (p40) and is determined by the same method. p40の発成レベルはMDA231では高くLLC-PK1ではlowかった.さらにLLC-PK1 cellsにPKC-down-regulationをおこすとintrinsic uP AのmRNA is stabilized and the p40 is increased under the condition of AのmRNA. Cytoplasmic fractionation and hnRNP Cに対するモノクローナルantibodyでpretreatmentするとp40のbinding activityが怗くlowerすることから、p40はhn RNPC autologous relationship, protein, ARE, decomposition of mRNA, and protection of mRNA. The cytoplasmic analysis of the cytoplasm was carried out and the binding activity of p40 was strengthened and inhibited. The specific blocking agent of p38 MAP kinase in cells is involved in the decomposition and promotion of the non-translation domain of ARE3's mRNA.従ってAREを IntroductionしたmRNA decompositionはp38 MAP kinaseが关るシグナル伝达の経路にあることが Shows instigationされた.

项目成果

Nanbu R,Nagamine Y: "Mode of transfection influences the stability of ectopically expressed mRNA." Biophys Biochem Acta. (in press).

Nanbu R，Nagamine Y：“转染模式影响异位表达 mRNA 的稳定性。”