有機溶媒耐性微生物が産生する有機溶媒に安定なプロテアーゼ

由耐有机溶剂的微生物产生的有机溶剂稳定的蛋白酶

• 批准号: 09750880
• 负责人: 荻野 博康
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09750880/
• 关键词: 有機溶媒耐性酵素; プロテアーゼ; 有機溶媒耐性微生物; Pseudomonas aeruginosa; ペプチド合成

プロテアーゼはタンパク質を加水分解する酵素であるが、有機溶媒存在下では、ペプチドやエステルの合成反応を触媒することができる。しかし、一般に酵素は有機溶媒に不溶であり、しかも有機溶媒存在下では容易に変性、失活する。そこで、有機溶媒に安定なプロテアーゼを生産するスクリーニングを行ったところ、有機溶媒存在下でも生育し、有機溶媒に安定な酵素を生産するPseudomonas aeruginosa PST-01株を得た。P・ST-01株が生産するプロテアーゼ(PST-01プロテアーゼ)を精製し、SDS-PAGEで分析したところ、分子量約38,000のタンパク質であることがわかった。加水分解反応の至適pHは8.6、至適温度は55℃であり、65℃以下で非常に安定であった。種々の阻害剤を添加したときの活性測定により本酵素はメタルプロテアーゼであることがわかった。また、PST-01プロテアーゼの有機溶媒安定性を調べたところ、多くの有機溶媒存在下で非常に安定であり、特にアルコール等の水に溶ける有機溶媒を添加したときは、加えないときに比べて安定性が増大することがわかった。さらに、種々のペプチド合成を行った。Cbz-ArgとLeu-NH_2からCbz-Arg-Leu-NH_2の合成反応では、収率はCbz-Argの初濃度にはほとんど依存せず、Leu-NH_2の初濃度に大きく依存した。また、50%ジメチルホルムアミドもしくはジメチルスルホキシド存在下で収率は約80%に達した。さらに、pH7.0〜12.0で高い収率を示した。

In the presence of organic solvents, the synthesis of enzymes for the hydrolysis of substances can be carried out. Generally, enzymes are insoluble in organic solvents, and they are easily inactivated in the presence of organic solvents. Pseudomonas aeruginosa PST-01 strain was obtained in the presence of organic solvents. P·ST-01 strain was purified and analyzed by SDS-PAGE. The molecular weight of P·ST-01 strain was about 38,000. Water decomposition reaction to pH 8.6, to the appropriate temperature of 55℃, 65℃ below very stable. The enzyme was added to the enzyme and its activity was measured. The organic solvent stability of PST-01 is very stable in the presence of many organic solvents. The organic solvent stability of PST-01 is increased by adding organic solvents.さらに、种々のペプチド合成を行った。The synthesis of Cbz-Arg and Leu-NH_2 depends on the initial concentration of Cbz-Arg and the initial concentration of Leu-NH_2. 50% of the total number of visitors to the site is about 80%. At present, pH 7.0 ~ 12.0 is high.

项目成果

H.Ogino et al.: "Purification and Characterization of Organic Solvent-Stable Protease from Organic Solvent-Tolerant Pseudomonas aeruginosa PST-01" Journal of Bioscience and Bioengineering. 87・1. 62-69 (1999)

H.Ogino 等人：“有机溶剂耐受铜绿假单胞菌 PST-01 的有机溶剂稳定蛋白酶的纯化和表征”《生物科学与生物工程杂志》87·1（1999）。

H,Ishikawa and H.Ogino: "Enzymes Stable in the Presence of Organic Solvents" Proc.5th China-Japan Joint Symposium on Enz.Eng.6-7 (1998)

H,Ishikawa 和 H.Ogino:“酶在有机溶剂存在下稳定”Proc.5th China-Japan Joint Symposium on Enz.Eng.6-7 (1998)