バキュロウイルス全遺伝子の組織的機能解析とミニゲノム発現ベクターの開発

所有杆状病毒基因的系统功能分析和小基因组表达载体的开发

• 批准号: 09760050
• 负责人: 姜 媛瓊
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760050/
• 关键词: バキュロウイルス; シャトルベクター; カテプシン; トランスポゾン; 2-ハイブリッド法; 相互作用; 宿主; ジンクフィンガー; バキュロウィルス; ゲノム; キチナーゼ

本研究では、バキュロウイルスの全遺伝子の機能を組織的に解析することを目的とする。まず、酵母のYAC(YeastArtificial Chromosome)ベクターにカイコ核多角体病ウイルス(BmNPV)の全ゲノムを導入したシャトルベクターを作成し、ウイルスゲノムが酵母中で維持されていることや本来の宿主である昆虫細胞で増殖できることを確かめた。また、これまでに分子生物学的に解析されていないコドリンガ顆粒病ウイルス(CpGV)の遺伝子解析を行った。クローン化した3.2kbのDNA断片に大腸菌のトランスポゾンを挿入し、塩基配列を決定したところ、この断片上に存在する二つのORFはキチナーゼとカテブシンの遺伝子であると考えられた。そこで、BmMPVのカテプシン遺伝子欠損株にCpGVのカテプシン遺伝子を導入するレスキュー実験を行い、CpGVカテプシンが宿主の体を分解することでウイルスの伝播に重要な役割を果たしていることを明らかにした。10年度は、機能解析の一環としてウイルスの遺伝子産物と相互作用する宿主の遺伝子産物の同定を試みた。酵母の2-ハイブリッド法を用いて、ウイルスの感染後最も初期に発現されるIE-2蛋白質と相互作用している蛋白質のスクリーニングを行った。その結果、宿主のジンクフィンガー蛋白質(ZFP)とIE-2が、またIE-2同士が相互作用していることがわかった。ZFPは新規の蛋白質で、機能はまだわかっていないが、8つのジンクフィンガードメイン(C2H2type)をもつ蛋白質で、細胞で強制的に発現させると細胞に悪影響を及ぼすことを示唆する結果が得られている。また、IE-2のホモダイマー形成には、C末端の80アミノ酸が必要であることも明らかにした。ウイルスの増殖においてのこれらの相互作用が担う役割について、機能解析を急いでいる。また、BmMPVのゲノム上に5コピー存在するbro(baculovirうs repeated ORFs)遺伝子の解析を行ったところ、この5つは感染初期に発現される遺伝子で、5つが相補的に機能を果たしていることを示唆する結果が得られた。現在、これらの結果をまとめた論文を準備中である。

The purpose of this study is to analyze the function and organization of all genes in the genome. YAC(YeastArtificial Chromosome) of yeast is introduced into the whole system of BmNPV (Nuclear Polyhedrosis Virus), and the whole system of BmNPV is produced and maintained in yeast. The molecular biology analysis of CpGV was carried out. A 3.2 kb DNA fragment is a fragment of Escherichia coli that contains two ORFs. The ORF is a fragment of Escherichia coli that contains two ORFs. In this case, BmMPV's transmission vector is deficient in plant damage, CpGV's transmission vector is introduced into the system, and CpGV's transmission vector is decomposed into host cells. In 2010, a series of experiments were conducted to analyze the identity of the host gene products and their interactions. The yeast's 2-cell protein interaction is detected in the early stages of infection, and the yeast's 2-cell protein interaction is detected in the early stages of infection. As a result, the host protein (ZFP) interacts with IE-2 and IE-2. ZFP is a new type of protein, its function is different from that of protein (C2H2 type), and its effect on cell stress is different from that of protein. Ie-2 is the only one that has the ability to react. The interaction between them is the responsibility of service division and function analysis. BmMPV must be displayed on the 5 th floor of the building, and the bro(baculovir's repeated ORFs) must be displayed on the 5 th floor. Now, the results of the paper are in preparation.

项目成果

Kang, WonKyung: "Identification and characterizationof the Cydia pomonella granulovirus cathepsin and chitinase genes" J.Gen.Virol.79. 2283-2292 (1998)

Kang, WonKyung：“Cydia pomonella 颗粒病毒组织蛋白酶和几丁质酶基因的鉴定和表征”J.Gen.Virol.79。

Kang, WonKyung: "Complete sequence and transposon mutagenesis of the Bam HI J fragment of Cydia pomonella granulosis virus" Virus Genes. 14・2. 131-136 (1997)

Kang, WonKyung：“Cydia pomonella 颗粒病毒的 Bam HI J 片段的完整序列和转座子诱变”病毒基因 14・2 (1997)。