タイト結合構成蛋白オクルーディンに関する分子解剖学的研究
紧密连接组成蛋白occludin的分子解剖学研究
基本信息
- 批准号:09770010
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 1998
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
タイト結合(TJ)の裏打ち蛋白ZO-1,-2,-3は複合体を形成しTJに局在する。今回、ZO-2のcDNAをC末側から順に削りmyc tagを付与してMDCK細胞で発現し、TJにおけるZO-2の複合体形成様態を調べた。【方法】ZO-2はN末側から3つのPDZ domains,SH3 domain,GK domainおよびプロリンに富む領域(C-tail)を持つ。C末側からこれらのdomainを順に削りmyc tagを付与してpCI-neo vectorに挿入後、MDCK細胞に導入しG-418で選択して安定株を得た。それぞれをZO2myc,PSGmyc,PSmyc,PDZmycと呼ぶ。また、全長をNRK細胞に導入し安定株を得た(NRK/ZO2myc)。発現の確認は、イムノブロットで行った。各遺伝子産物の局在はanti-myc抗体を用いて蛍光抗体法で調べた。細胞間の透過性は、単層培養細胞の電気抵抗値(TER)により評価した。各細胞についてoccludin(OC),ZO-1の発現量をイムノブロットで比較した。【結果と考察】mycのシグナルは、ZO2myc,PSGmycではTJに認められた。PSmycではごく一部がTJに局在し、大部分はPDZmycと同様に細胞質および一部核に認められた。MDCK細胞においてZO-2が安定してTJに局在するためにはGK domainまでが必要であることがわかった。NRK/ZO2mycではmycのシグナルは細胞質に認められ、ZO-1とは共存しなかった。この結果は、NRK細胞においてはZO-2はZO-1と結合しないことを示唆している。ZO-3は、ZO-1と結合するがZO-2とはしないことがわかっている。従って、ZO-2はN末側で間接的にZO-1,ZO-3と複合体形を形成することが示唆される。TERは、ZO2myc,PSGmycではコントロールと同程度であったが、PSmyc,PDZmycでは上昇した。しかし、各細胞間でOC,ZO-1の発現量の差は認められず、このTERの上昇の機序は今のところ不明である。なお,今回の結果は,第104回日本解剖学会にて発表する.
TJ binding protein ZO-1,-2,-3 complexes are formed. Now, ZO-2 cDNA was transferred to MDCK cells, and the complex formation state of ZO-2 was modulated. [Method] ZO-2 has 3 PDZ domains,SH3 domain,GK domain and C-tail. The myc tag was added to the pCI-neo vector at the end of C. coli, and then MDCK cells were introduced into G-418 cells. ZO2myc,PSGmyc,PSmyc,PDZmyc. NRK/ZO2myc It is confirmed that the company will continue to operate. The anti-myc antibody was used to modulate the expression of each gene product. Intercellular permeability and electrical resistance (TER) of monolayer cultured cells were evaluated. The amount of occludin(OC) and ZO-1 in each cell was compared. [Results] myc, ZO2myc, PSG myc A part of TJ is in the middle, most of them are in the middle, and the other part is in the middle. MDCK cell ZO-2 is stable, and GK domain is necessary. NRK/ZO2myc myc The result is that NRK cells are ZO-2 and ZO-1. ZO-3, ZO-1 and ZO-2 are combined. ZO-1,ZO-3 and ZO-2 are formed indirectly at the terminal side of N. TER, ZO2myc,PSGmyc The difference of OC,ZO-1 expression between cells was identified, and the mechanism of TER rise was unknown. The 104 th Japanese Anatomical Society.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
T.Inai et al.: "Immunohistochemical localization of connexin43 in the enamel organ of the rat upper incisor during ameloblast development." Archives of Histology and Cytology. Vol.60,No.3. 297-306 (1997)
T.Inai 等人:“成釉细胞发育过程中大鼠上门牙釉质器官中连接蛋白 43 的免疫组织化学定位。”
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