Study of the role of desmosome cadherin in cell motility and lymph node metastasis

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本研究は、アドヘレンス結合蛋白E-cadherin (Ecad)、デスモソーム蛋白Desmoglein (DSG) 1、DSG3の発現の組合せに着目し、口腔扁平上皮癌(OSCC)で集団運動が起こっている可能性と上皮層内部で起こる初期変化を調べることを目的とする。令和４年度は、DSG1およびDSG3をゲノム編集により、遺伝子破壊した安定細胞株をマウスケラチノサイト(K38)で作成すること、OSCC患者の生検試料を収集することが当初の計画であった。令和４年度は、DSG3遺伝子をゲノム編集で破壊したK38細胞株DSG3KO、さらにEGFPを発現するEGFP-DSG3KOを作製した。Ca添加による細胞接着形成過程で、DSG1の細胞接着部位への集積がDSG3KOではWT（野生型K38）に比べ遅延することがわかった。細胞接着形成後の接着強度をDissociation assayで調べると、DSG3KOはWTより接着強度が減弱し、１日後より３日後でさらに接着強度が弱まることが分かった。DSG3とp38 MAPKとの関連が報告されており、今回の結果がp38 MAPKの活性化と関連があるか来年度は調べる。また、K38はDSG1, DSG2, DSG3が発現しており、デスモソーム形成において、同種のDSGによるホモ結合か異種のDSGによるヘテロ結合かは明らかでない。WTとEGFP-DSG3KOを混合培養して、異種細胞間結合 (WTとEGFP-DSG3KOの間の結合)を免疫染色で調べた。その結果、DSG1, DSG2はすべての異種細胞間結合にみられたが、DSG3は異種細胞間結合には一部を除いてみられなかった。この結果から、DSG3の大部分はDSG3同氏のホモ結合で接着していると考えられた。これらの結果を総合すると、DSG3の欠失は、デスモソーム形成を遅延し、細胞間結合を弱めることがわかった。