大腸癌における毛細血管拡張性運動失調症(AT)遺伝子変異の証明 テロメア長短縮

结直肠癌中共济失调性毛细血管扩张（AT）基因突变的证明端粒长度缩短

• 批准号: 09770341
• 负责人: 木内 喜孝
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770341/
• 关键词: テロメア; 大腸癌; 毛細血管拡張性運動失調症遺伝子

平成9年度の検討にて確認したテロメア長5kb以下を示す26症例を対象として,以下の検討を行った.26症例の,末梢血単核球と大腸癌組織より,total RNAをacid guanidinium-phenol-chloroform法で調製した.次に昨年度,スプライシング異常や大きな欠失が存在しないことが確認されている,キナーゼドメイン周辺約2kbについて前述のRNAを用いて変異の有無をスクリーニングした.スクリーニングに用いた方法はRestriction Endonuclease Fingerprinting(REF)法である.まずtotal RNAから,ランダムヘキサマーをプライマーとし,逆転写酵素でcDNAを作成した.次にお互いのPCR産物がオバーラップする2組のプライマーセットを設定し,cDNAを鋳型としてPCRを施行した.その結果すべての,検体でPCR産物を得ることができた.このPCR産物が目的の遺伝子特異的であることは,直接シークエンスで確認した.このPCR産物を制限酵素Hinf 1,BamH 1,Dde 1,Mbo 1,Ase 1にてそれぞれ消化後,各断片をT4 kinaseで標識し,single strand conformation polymorphismにて異常バンドを確認した.まず26症例の末梢血単核球でREFを施行したところ1例で異常バンドを確認した.その異常バンドを分取精製後,シークエンスを行い確認したところ,アミノ酸配列の置換をともなわない多型性であることを確認した.また大腸癌組織でREFを施行したところ,前記症例以外に異常バンドの出現は確認できなかった.このことから少なくとも,テロメア長短縮を示す大腸癌にはataxia teleangiectasia遺伝子変異は伴わないことが確認された.またテロメア長が短くない症例15症例についてもREF法にて解析を加えたが,異常は確認されなかった.このことから,ヒト大腸癌発癌過程に,ataxia teleangiectasia遺伝子変異は強く関与していないことが明らかとなった.

26 cases of peripheral blood mononuclear cells and colorectal cancer tissues were detected by total RNA guanidinium-phenol-chloroform method. Last year, the presence and absence of abnormal RNA was confirmed, and the RNA was detected at a circumference of about 2 kb. Restrict Endonuclease Fingerprinting(REF) Method. The total RNA is generated by the reverse transcription of cDNA. 2 sets of PCR products were selected for sequencing and PCR was performed. The PCR product was obtained from the sample. This PCR product is specific to the gene of interest and is directly confirmed by the detection of the gene. The PCR products were digested with restriction enzymes Hinf 1,BamH 1,Dde 1,Mbo 1,Ase 1, and identified by T4 kinase. In 26 cases, the peripheral blood sample was identified as abnormal. After the separation and purification of the abnormal elements, it is confirmed that the acid sequence is substituted and the polymorphism is confirmed Colorectal cancer tissue was identified as abnormal except for previous cases. This is the first time I've ever seen a patient with colorectal cancer. 15 cases of abnormal symptoms were identified by REF method. In the process of colorectal cancer development,ataxia teleangiectasia has different genetic characteristics.