カリクレイン・キニン系の気管支喘息の調節機構:キニノゲン欠損ラットを用いた解析

激肽释放酶-激肽系统对支气管哮喘的调节机制：激肽原缺陷大鼠的分析

• 批准号: 09770409
• 负责人: 塚越 秀男
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770409/
• 关键词: カリクレイン・キニン系; ブラディキニン; B1受容体; サイトカイン; 肺胞マクロファージ; 気管支喘息; プラディキニン

1996年Pesqueroらにより報告されたマウス・ブラディキニンB_1受容体(BDKRB1)cDNAをもとに特異的プライマーおよびプローブを作成した。BDKRB1mRNA発現量をABIPRISM7700を用いreal time quantitativeRT-PCR法により検討した。リポポリサッカライド(LPS)尾静脈内投与5時間後、マウス心臓、肺、肝臓を摘出後mRNAを抽出しこれをBDKRB1mRNAおよびGAPDH mRNA発現量の基準値として使用した。マウス肺胞マクロファージ培養細胞株(MH-S)をマウス・リコンビナント・インターリュウキン1β(IL-1β:0,1,3,10ng/ml)にて刺激0,1,2,3,4,5時間後、MH-S細胞よりmRNAを抽出しBDKRB1mRNA発現量を測定した。BDKRB1mRNAはIL-1β刺激3時間後最大となり刺激前の約1000倍に達した。なお使用したIL-1β濃度間においてBDKRB1 mRNA発現量に有意差を認めなかった。BDKRB1発現に関する検討を[^3H]des-Arg^<10>-kallidinを用いbinding assay法にて行った。5ng/mlIL-1β24時間刺激によりMH-S細胞はBDKRB1を発現しそのKd値は2.95nM、Bmax値は約670sites/cellであった。5ng/mlIL-1β共存下MH-S細胞を24時間培養後、BDKRB1アゴニストdes-Arg^<10>-kallidin(100μ M;0,4,8,12時間)にてMH-S細胞を刺激しtumor-necrosisfactor(TNF)-α産生量をELISAにて検討した。IL-1β前処置群はdes-Arg^<10>-kallidin刺激8時間後TNF-α産生量が有意に増加した。des-Arg^<10>-kallidinの至適濃度は3-100nMであった。また、IL-1β前処置群はdes-Arg^<10>-kallidin刺激により細胞内カルシウム・イオン濃度の有意な上昇が認められた。以上より肺胞マクロファージ活性化におけるサイトカインの関与とカリクレイン・キニン系の関与が示唆され、気管支喘息の病態の解明に繋がることが期待された。また、以上の結果はBiochem Biophys Res Communに現在投稿中である。

In 1996, Pesquero reported that the BDK1 receptor was isolated. ABIPRISM7700 was used to detect BDKRB1 mRNA expression by real time quantitative RT-PCR. 5 hours after LPS administration, BDKRB1 mRNA and GAPDH mRNA were extracted from heart, lung and liver. The expression of BDKRB1 mRNA in cultured MH-S cells was measured after 0, 1, 2, 3, 4, 5 days of stimulation with IL-1β(IL-1β:0,1,3,10ng/ml). BDKRB1 mRNA reached a maximum of about 1000-fold after 3 hours of IL-1β stimulation. There is an intentional difference in BDKRB1 mRNA expression between IL-1β concentrations and the use of IL-1 β. BDKRB1 detection related to [^3H]des-Arg^<10>-kallidin is performed using the binding assay. 5ng/ml IL-1β24 time-stimulated MH-S cells to produce BDKRB1 with a Kd value of 2.95 nM and a Bmax value of approximately 670sites/cell After MH-S cells were cultured for 24 hours in the presence of 5ng/ml IL-1β, the <10>tumor-necrosis factor (TNF)-α production of MH-S cells stimulated by BDKRB1-des-Arg^ -kallidin(100μ M; 0, 4, 8, 12 hours) was measured by ELISA. TNF<10>-α production increased significantly after des-Arg^ -kallidin stimulation for 8 hours. Des-Arg^<10>-kallidin was found at optimal concentrations of 3-100nM. IL-1β receptor was stimulated by des-Arg^<10>-kallidin, and the intracellular concentration of IL-1 β increased intentionally. The relationship between lung activation and respiratory system, and the relationship between respiratory system and respiratory system, and the relationship between respiratory system and respiratory system are discussed. The above results are published in Biochem Biophys Res Commun.

项目成果

塚越秀男: "MH-S cellにおけるブラディキニンB1受容体発現に対するIL-1βの影響に関する基礎的検討。" 呼吸. 18(2). S69-S70 (1999)

Hideo Tsukagoshi：“IL-1β 对 MH-S 细胞中缓激肽 B1 受体表达的影响的基础研究”18(2)。

Hacsku A.Macary P.Huang TJ.Tukagoshi H.et al.: "Adoptive transfer of allergen-speoific C'D^+_4 cells induces airway inflamination and hyperresponliveness in brown-Norway rats." Immunology. 91. 176-185 (1997)

Hacsku A.Macary P.Huang TJ.Tukagoshi H.et al.：“过敏原特异性 CD^ _4 细胞的过继转移会诱导棕色挪威大鼠的气道炎症和高反应性。”

Uno D.Tsukagoshi H, et al.: "Effects of the calcium ionophore A23187 on airway responsiueness to histamine and substance P in guinea pigs." Inflammation Researoh. 46. 108-113 (1997)

Uno D.Tsukagoshi H 等人：“钙离子载体 A23187 对豚鼠气道对组胺和 P 物质反应的影响。”

Iwamae S, Tsugagoshi H, et al.: "The role of neatral endo peptiduse in endo tox in-ineluced brawhial hyperresponsiveness to substance P inguinea-pigs." Allergology International. 47. 13-22 (1998)

Iwamae S、Tsugagoshi H 等人：“中性内肽在内毒素引发的对 P 物质的豚鼠臂部高反应性中的作用。”