カリクレイン・キニン系の気管支喘息の調節機構:キニノゲン欠損ラットを用いた解析

1996年Pesqueroらにより報告されたマウス・ブラディキニンB_1受容体(BDKRB1)cDNAをもとに特異的プライマーおよびプローブを作成した。BDKRB1mRNA発現量をABIPRISM7700を用いreal time quantitativeRT-PCR法により検討した。リポポリサッカライド(LPS)尾静脈内投与5時間後、マウス心臓、肺、肝臓を摘出後mRNAを抽出しこれをBDKRB1mRNAおよびGAPDH mRNA発現量の基準値として使用した。マウス肺胞マクロファージ培養細胞株(MH-S)をマウス・リコンビナント・インターリュウキン1β(IL-1β:0,1,3,10ng/ml)にて刺激0,1,2,3,4,5時間後、MH-S細胞よりmRNAを抽出しBDKRB1mRNA発現量を測定した。BDKRB1mRNAはIL-1β刺激3時間後最大となり刺激前の約1000倍に達した。なお使用したIL-1β濃度間においてBDKRB1 mRNA発現量に有意差を認めなかった。BDKRB1発現に関する検討を[^3H]des-Arg^<10>-kallidinを用いbinding assay法にて行った。5ng/mlIL-1β24時間刺激によりMH-S細胞はBDKRB1を発現しそのKd値は2.95nM、Bmax値は約670sites/cellであった。5ng/mlIL-1β共存下MH-S細胞を24時間培養後、BDKRB1アゴニストdes-Arg^<10>-kallidin(100μ M;0,4,8,12時間)にてMH-S細胞を刺激しtumor-necrosisfactor(TNF)-α産生量をELISAにて検討した。IL-1β前処置群はdes-Arg^<10>-kallidin刺激8時間後TNF-α産生量が有意に増加した。des-Arg^<10>-kallidinの至適濃度は3-100nMであった。また、IL-1β前処置群はdes-Arg^<10>-kallidin刺激により細胞内カルシウム・イオン濃度の有意な上昇が認められた。以上より肺胞マクロファージ活性化におけるサイトカインの関与とカリクレイン・キニン系の関与が示唆され、気管支喘息の病態の解明に繋がることが期待された。また、以上の結果はBiochem Biophys Res Communに現在投稿中である。

1996年Pesqueroらにより報告されたマウス・ブラディキニンB_1受容体(BDKRB1)cDNAをもとに特異的プライマーおよびプローブを作成した。BDKRB1mRNA発現量をABIPRISM7700を用いreal time quantitativeRT-PCR法により検討した。リポポリサッカライド(LPS)尾静脈内投与5時間後、マウス心臓、肺、肝臓を摘出後mRNAを抽出しこれをBDKRB1mRNAおよびGAPDH mRNA発現量の基準値として使用した。マウス肺胞マクロファージ培養細胞株(MH-S)をマウス・リコンビナント・インターリュウキン1β(IL-1β:0,1,3,10ng/ml)にて刺激0,1,2,3,4,5時間後、MH-S細胞よりmRNAを抽出しBDKRB1mRNA発現量を測定した。BDKRB1mRNAはIL-1β刺激3時間後最大となり刺激前の約1000倍に達した。なお使用したIL-1β濃度間においてBDKRB1 mRNA発現量に有意差を認めなかった。BDKRB1発現に関する検討を[^3H]des-Arg^<10>-kallidinを用いbinding assay法にて行った。5ng/mlIL-1β24時間刺激によりMH-S細胞はBDKRB1を発現しそのKd値は2.95nM、Bmax値は約670sites/cellであった。5ng/mlIL-1β共存下MH-S細胞を24時間培養後、BDKRB1アゴニストdes-Arg^<10>-kallidin(100μ M;0,4,8,12時間)にてMH-S細胞を刺激しtumor-necrosisfactor(TNF)-α産生量をELISAにて検討した。IL-1β前処置群はdes-Arg^<10>-kallidin刺激8時間後TNF-α産生量が有意に増加した。des-Arg^<10>-kallidinの至適濃度は3-100nMであった。また、IL-1β前処置群はdes-Arg^<10>-kallidin刺激により細胞内カルシウム・イオン濃度の有意な上昇が認められた。以上より肺胞マクロファージ活性化におけるサイトカインの関与とカリクレイン・キニン系の関与が示唆され、気管支喘息の病態の解明に繋がることが期待された。また、以上の結果はBiochem Biophys Res Communに現在投稿中である。