多機能性蛋白としてのキニノゲンの生体内における役割に関する研究

多功能蛋白激肽原的体内作用研究

• 批准号: 07772242
• 负责人: 林 泉
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772242/
• 关键词: 高分子キニノゲン; システインプロテアーゼインヒビター; ブラディキニン; バキュロウイルス; 発現; 昆虫細胞; カリクレイン・キニン系; リコンビナント

生理活性ペプチド、ブラディキニンの前駆体蛋白質である高分子キニノゲンの分子内には、シスタチンファミリーとの相同性を有するGln-Val-Val-Ala-Gly (QVVAG)の配列がそのH鎖内の2カ所で保持されている。一方で精製した蛋白の再構成実験では、キニノゲンがシステインプロテアーゼであるパパインと1:1の複合体を形成することによりその酵素活性を阻害することが報告されている。しかしながらH鎖上の2つのQVVAG配列のどちらが実際に機能しているかについては不明であるため、それぞれのドメインのアミノ酸を変異させたミュータントタイプのキニノゲンを作製し、in vitroでインヒビター活性を調べることによって明らかにされることが予想された。そこで本実験においては、バキュロウイルスを用いた昆虫細胞系でリコンビナントのワイルドタイプおよびミュータントタイプの高分子キニノゲンを発現させるためのベクターDNAを作製した。即ち2ヶ所のQVVAG配列を標的とし、(1) 188番目のQからAへの変異、(2) 310番目のQからAへの変異、(3) 188番目および310番目のQからAへの変異を導入するオリゴヌクレオチドを合成し、クローン化したラットの高分子キニノゲンcDNAを鋳型にして3種類のミュータントcDNAをKunkel法により作製した。そしてそれぞれのDNAについてシークエンスを行い、変異の導入を確認した。次にミュータント高分子キニノゲンcDNAをバキュロウイルストランスファー用のベクターであるpVL1393に組み込み、発現プラスミドを構築した。今後リコンビナントキニノゲンをさなぎ卵巣細胞由来Sf9細胞で発現させ精製後、システインプロテアーゼプロテアーゼに対する阻害活性をin vitroで測定する予定である。

Physiological activity: Gln-Val-Val-Ala-Gly (QVVAG), precursors, high molecular weight, intramolecular protein, intramolecular protein, homology, homology, Gln-Val-Val-Ala-Gly (QVVAG), protein, protein and protein. On the other hand, the protein was reorganized into a mixture of protein and protein, which was then reorganized into a complex at 1:1 to form an enzyme activity blocker. The following information is required: 1. The QVVAG is assigned to the international machine. This is not the case. You are not aware of the problem. You need to know that you are not aware of the problem. You need to know that you do not know what you want to do. You need to know that you are not aware of the situation. You need to know that you are not aware of the situation. You need to know that you do not want to. You are not aware that you are not aware of the problem. You are not aware that you want to. You are not aware of what you want. In this paper, we use the insect cell line, the insect cell line and the insect cell line. That is, the distribution of QVVAG in "2", (1) 188, (2) 310, (3) 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, 310, In this paper, we introduce the application of cDNA Kunkel method in the treatment of high molecular weight, low molecular weight, high molecular weight, high molecular weight, Please confirm that you need to DNA the line and enter the confirmation button. In the second place, the high molecular weight, the cDNA, the high molecular weight, the temperature, the temperature and the temperature. From now on, you may want to know the origin of the egg cells. After the Sf9 cells have been detected, you will be able to determine the inhibitory activity of the eggs. The in vitro test has determined the predetermined concentration.