肺小細胞癌におけるproGRP遺伝子の発現調節と遺伝子治療への応用に関する研究

小细胞肺癌proGRP基因表达调控及其在基因治疗中的应用研究

基本信息

批准号：
09770427
负责人：
内田和宏
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

Progastrin-releasing peptide(proGRP)はGRPの前駆体で,肺小細胞癌(SCLC)細胞で特異的に産生されるため,SCLCの腫瘍マーカーとして用いられている.近年,GRPのSCLCにおけるautocrine growth factorとしての作用が注目されているが,これはSCLC細胞から分泌されたGRPが癌細胞膜表面の主にGRP受容体(GRPR)に結合し,G蛋白を介するsignal伝達系を介して細胞増殖を促すことによるものである.1997および1998年度の今研究では,(1)SCLC患者の血清proGRP値と腫瘍内のproGRP mRNA発現との相関,(2)proGRP遺伝子発現SCLC腫瘍組織におけるmRNAのalternativesplicingの状況,(3)SCLC腫瘍組織におけるGRP蛋白産生,(4)SCLC腫瘍組織中のproGRP遺伝子およびGRPR遺伝子の発現の相関について検討した.まず,(1)SCLC7例から同意を得た上で腫瘍組織を採取し,mRNAを抽出後逆転写反応(RT)によりcDNAに変換し,proGRP mRNAに特異的なプライマーを用いてnested PCR増幅により解析した.その結果,血清proGRP値が高値を示した5例においてproGRP mRNAの発現が認められたが,上昇をみないSCLC患者2例の腫瘍内ではproGRP mRNAは検出されなかった.(2)次いで,proGRP遺伝子転写後alternative splicingによりtypeI,II,IIIの3種の成熟mRNAが生成されうるため,これら3群のmRNAの発現状況を比較検討した.その結果,腫瘍組織内でproGRP mRNAが発現している症例においてはmRNA分画の平均はtypeI 58%,typeII 0%,typeIII 42%であり,症例間で明らかな差異は認められなかった.(3)さらに,腫瘍組織内でのGRP蛋白産生の有無を抗ヒトGRP抗体を用いた免疫染色にて検討したところ,血清proGRP高値で腫瘍組織内のproGRP mRNA陽性の症例のみで,細胞内のGRP蛋白を確認しえた.(4)GRPR遺伝子mRNA発現については,7例のSCLC腫瘍をRT-nested PCR法にて検討の結果,proGRP mRNA発現の認められた5例中2例で陽性であった.以上よりGRPのSCLC細胞に対するautocrine growth factorとしての作用と,さらにGRPR遺伝子発現に対する制御作用の可能性が示唆された.今後.SCLC腫瘍組織内における他のGRP受容体であるNMB-RおよびBRS-3のmRNA発現の有無についても解析し,GRPがこれらの受容体を介してautocrine growth factorとして関与している可能性について検討するとともに,GRP産生SCLCと非産生SCLC患者との間に腫瘍増殖能や治療に対する反応性,予後などの臨床的差異があるかについても検討する予定である.

促进蛋白释放肽（Progrp）是GRP的前体，是在小细胞肺癌（SCLC）细胞中特异性产生的，被用作SCLC的肿瘤标记。近年来，GRP作为SCLC中的自分泌生长因子引起了人们的注意，因为从SCLC细胞中分泌的GRP主要与癌细胞膜表面上的GRP受体（GRPR）结合，并通过G蛋白介导的信号传递系统促进细胞增殖。在1997年和1998年的这项研究中，（1）SCLC患者的血清刚刚水平和肿瘤中的progrp。与mRNA表达的相关性，（2）MRNA在SCLC肿瘤组织中mRNA的替代剪接状态，（3）SCLC肿瘤组织中的GRP蛋白产生，（4）SCLC肿瘤组织中Progrp基因和GRPR基因的表达。首先，（1）从七个SCLC病例中获得同意后收集肿瘤组织，并通过反转录反应（RT）提取mRNA并转化为cDNA，并使用特定于Progrp mRNA的引物通过嵌套的PCR扩增进行分析。结果，在5例血清前体值高的病例中观察到了前MRNA的表达，但两名SCLC患者的肿瘤没有增加。在两名没有升高的SCLC患者的患者的肿瘤中观察到了progrp。未检测到mRNA。（2）接下来，由于可以通过前后转录后的替代剪接产生三种类型的成熟mRNA，I型，II和III，因此我们比较了这三组的表达状态。结果，如果在肿瘤组织中表达前mRNA的情况下，平均mRNA分数为58％，型为0％，型为42％，并且在病例之间未观察到明显的差异。（3）此外，当我们使用抗人类GRP抗体进行免疫染色在肿瘤组织中是否产生GRP蛋白的产生时，我们发现在肿瘤组织较高的肿瘤组织中，在肿瘤组织中的肿瘤组织中会产生。仅在mRNA阳性病例中证实细胞内GRP蛋白。（4）关于GRPR基因mRNA的表达，使用RT-螺旋PCR检查了7种SCLC肿瘤，5例置于前的mRNA表达的病例中有2例为阳性。这些结果表明，GRP充当SCLC细胞的自分泌生长因子及其对GRPR基因表达的潜在调节作用。我们还分析了SCLC肿瘤组织中的其他GRP受体NMB-R和BRS-3是否可以通过这些受体进行自分泌生长。我们还将研究它可能与之相关的可能性，并考虑产生GRP的SCLC患者（例如肿瘤生长能力，对治疗的反应和预后）之间是否存在临床差异。