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細胞コレステロール搬出を制御するアポリポタンパク質レセプターの同定と機能の解析

控制细胞胆固醇输出的载脂蛋白受体的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
09770493
负责人：
堂前純子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770493/
关键词：
apol : poprotein cholesterol cholesterol efflux apolipoprotein

项目摘要

細胞コレステロール搬出にかかわるアポリポタンパク質レセプターの同定と解析のため、マウス由来マクロファージ様細胞株RAW264を用いてアポAIの結合に伴うコレステローとリン脂質の放出を調べて以下の成果を得た。1) RAW264細胞に種々の濃度でアポAIを投与すると、無処理細胞では培養液中のコレステロール量はほとんど変化しなかった。一方、300μMdBcAMPで24時間処理した細胞では細胞コレステロールの放出に伴う培養液中コレステロール量の増加が見られた。また、リン脂質放出量もAキナーゼ活性化条件下でアポAI濃度依存性に増加することを確認した。2) dBcAMP処理時間を変えてRAW264細胞のアポAI反応性獲得に必要な時間を検討したところ、6-8時間以上のdBcAMP処理が必要であった。3) dBcAMP処理の際、RNA合成阻害剤ならびに蛋白質合成阻害剤を共存させ、RAW264細胞のアポAI反応性獲得に及ぼす影響を調べたところ、いずれの薬物もアポAIによる細胞コレステロールとリン脂質の放出を濃度依存的に抑制した。以上の実験結果より、RAW264細胞は細胞内Aキナーゼの活性化に伴ってアポAIへの反応性を獲得するが、これには新たなRNA合成と蛋白質合成の必要なことがわかった。昨年度までに明らかにしたAキナーゼの活性化による細胞表面上への特異的なアポAI結合部位の出現と合わせ、RAW264細胞は細胞コレステロール搬出にかかわるアポリポタンパク質レセプターの解析に有用な材料となることがわかった。

Cell line RAW264 was used to modulate lipid release from the protein. 1)RAW264 cells were cultured at concentrations of AI and untreated cells at concentrations of AI. The cells were treated with 300μ M dBcAMP for 24 hours, and the release of cAMP was accompanied by an increase in the amount of cAMP in the culture medium. It was confirmed that the concentration dependence of lipid release was increased under the condition of activation. 2)The time of dBcAMP treatment is necessary for RAW264 cells to acquire anti-AI activity. 3)During dBcAMP treatment, RNA synthesis inhibitors, protein synthesis inhibitors, RAW264 cell apoptosis and apoptosis were modulated, and lipid release was inhibited in a concentration-dependent manner As A result, RAW264 cells were able to acquire the necessary RNA and protein synthesis for intracellular activation of RNA and protein. In the past year, RAW264 cells have been activated and activated on the surface of cells. The specific AI binding sites appear and combine. RAW264 cells have been used for the analysis of useful materials.