劣性栄養障害型先天性表皮水疱症の動物モデルの作成と遺伝子治療の基礎研究-

隐性营养障碍先天性大疱性表皮松解症动物模型的建立及基因治疗基础研究

• 批准号: 09770637
• 负责人: 花川 靖
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770637/
• 关键词: 劣性栄養障害型先天性表皮水疱症; VII型コラーゲン; 表皮細胞; 不死化; アデノウイルスベクター

劣性栄養障害型先天性表皮水庖症の患者より表皮ケラチノサイトを分離培養し、一部の細胞はSV40ウイルス遺伝子にて不死化を行った。外来遺伝子の発現実験として不死化細胞にリポフェクション法にてenhanced green fluorescent protein(EGFP)DNAを導入した。約10%の細胞でEGFPが陽性であった。また、正常ケラチノサイトにアデノウイルスベクターを用いてEGFPを導入した。ほぼ100%の細胞に陽性所見が認められた。一方、全長VII型コラーゲン遺伝子のN末端領域にflag tagを挿入し、eukalyotic expression vecterであるpcDNA3に組み込んだもの(pcDNA-F-COL7A1)とtagなしのもの(pcDNA-COL7A1)を精製しCOS7細胞ヘリポフェクションし、免疫蛍光染色及び蛋白を回収し、ウエスタンブロッティングを行った。LH7.2(抗VII型コラーゲン抗体)、抗flag抗体を用いた免疫蛍光染色にてLH7.2で陽性所見が得られたが抗flag抗体では陰性であった。N末端にtagを挿入すると蛋白作製に問題がある可能性が考えられた。しかし、ウエスタンブロッティングにてLH7.2にて目的のバンドが認められなかった。そこで、DNAの配列を確認したところDNAに変異、欠損が認められた。現在全長VII型コラーゲン遺伝子を再度作成中である。正常全長VII型コラーゲン遺伝子を確認後、劣性栄養障害型先天性表皮水疱症の患者由来の表皮ケラチノサイトに正常遺伝子を導入予定である。

Patients with hypoplastic congenital epidermis hydrophoria were divided into two groups: the epidermis, the The enhanced green fluorescent protein (EGFP) DNA has been introduced into foreign countries by the method of immortality. About 10% of the EGFP cells are sexually active. Please use the EGFP to enter the database. I don't know what I saw. I didn't know what I saw. On the one hand, the full-length type VII immunoglobulin was detected in the N-terminal domain of the flag tag gene, and the eukalyotic expression vecter protein was detected in the N-terminal domain. The pcDNA-F-COL7A1 (pcDNA-F-COL7A1) tag cell cycle (pcDNA-COL7A1) was detected in the COS7 cells, immuno-light staining and protein staining were performed on the whole. LH7.2 (anti-VII antibody), anti-flag antibody (anti-flag antibody) and anti-flag antibody. The N-terminal tag protein was inserted into the protein as a problem to determine the possibility of transformation. I don't know, I don't know. Please confirm that you are not receiving DNA messages, and that you are not sure that you are in need of information. Now the full-length type VII bridge has been made into a middle class again. The patients with congenital epidermis blister of type VII and inferior congenital epidermis were enrolled in the predetermined pregnancy after the normal full-length pregnancy was correct.

项目成果

花川 靖、橋本公二: "組換えアデノウイルスを用いた表皮細胞への遺伝子導入法" Monthly book Derma.

Yasushi Hanakawa、Koji Hashimoto：“使用重组腺病毒将基因导入表皮细胞的方法”月刊 Derma。