多核巨細胞形成におけるサイトカイン及び接着分子の役割

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1、 多核巨細胞のcDNAライブラリーの構築:linker primer法を用いてcDNAを合成、pSPORT1 plasmid vecterをelectroporationにてJM109へ導入し、dDNAライブラリーを構築した。2、 多核巨細胞で特異的に高発現している遺伝子の同定:(1) differential hybidization多核巨細胞とMφのcDNAをそれぞれprobeとして、上記のライブラリーをスクリーニングした.これまでのところ多核巨細胞のprobeと特異的にハイプリダイズするクローンは検出されなかった。mRNA発現量の差が少なく、検出されなかった可能性も考えられた。(2)differential dispiay多核巨細胞の形成過程でmRNAを抽出し、蛍光ラベルoligo dT primerで逆転写反応を行い、'5 arbitarilyprimerでPCRを行った。変性アクリルアミドゲル電気泳動し、多核巨細胞形成過程で発現してきたバンドを切り出し、TA cloningを行った。これまでのところシークエンスされたものは、データベースの検索によりIL-6、MMP-9、fusion regulatory protein-1である。Northem blottingで確認すると同時に、さらに新たなバンドを検出、今後もクローニングを進める予定である。