骨肉腫におけるメソトレキセート耐性機構の分子生物学的解析

骨肉瘤甲氨蝶呤耐药机制的分子生物学分析

• 批准号: 12770799
• 负责人: 南雲 剛史
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Dental College (2001)Keio University (2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770799/
• 关键词: 骨肉腫; メソトレキセート; 耐性; Rb遺伝子; p53遺伝子; MTAP遺伝子; dihydrofolate reductase; cDNA microarray; 薬剤耐性; 葉酸代謝酵素; 分子生物学

14例の骨肉腫臨床材料を使用した。1、Rb変異とメソトレキセート(MTX)耐性:Rb遺伝子のSouthern blot解析またはRb蛋白の免疫染色性より6例においてRb変異を認めた。これらは全て画像上も組織学的にもMTX耐性と判定され、変異が検出されなかった8例と比較し有意差を認めた。これはRb変異をもつ細胞株がMTX耐性を示したin vitroの実験結果と同様であった。2、p53変異とMTX耐性:p53遺伝子のPCR-SSCP-direct sequence解析またはp53蛋白の免疫染色性より10例において変異を認めた。このうちMTX耐性と判定されたものは5例であり、p53変異はRb変異と異なりMTX耐性機構への関与は少ないことが示唆された。3、Methylthioadenosine phosphorylase (MTAP)欠失とMTX耐性:今回の臨床材料においてはmultiplex PCRを用いた解析でMTAP遺伝子のホモ欠失は認めなかった。以上より臨床において骨肉腫のMTX耐性機序としてはRb遺伝子変異が重要であり、昨年度のデータと合わせるとRb変異例でのdihydrofolate reductaseの発現増強が直接関与すると考えられた。一方、p53変異やMTAP欠失はMTX耐性への関与は少ないと思われた。4、cDNA microarrayによるMTX耐性に関与する分子の検索:今回、in vitroではMTX耐性骨肉腫株が得られなかったため、ヌードマウス可移植株MNNG/HOSを用いてin vivoでの耐性獲得を試みている。

14 cases of osteoma clinical material use. 1. Rb protein differentiation and MTX tolerance: Southern blot analysis of Rb protein and immunostaining of Rb protein were performed in 6 cases. The results showed that the MTX tolerance was higher than that of the control group. The results of MTX tolerance in different Rb cell strains are similar to those in vitro. 2. p53 variant MTX tolerance: PCR-SSCP-direct sequence analysis of p53 gene and immunostaining of p53 protein in 10 cases The MTX tolerance test was conducted in 5 cases, and the MTX tolerance test was conducted in 5 cases. 3. Methylthioadenosine phosphorylase (MTAP) deficiency and MTX tolerance: the clinical materials of this time were analyzed by multiplex PCR. The above-mentioned changes in the Rb gene are important in the clinical mechanism of MTX resistance in osteosarcoma, and are directly related to the increased occurrence of dihydrofolate reductase in the Rb gene. One side, p53, different MTAP, MTX, MTX. 4. cDNA microarray for MTX tolerance related molecular search: now, in vitro MTX tolerant osteoma strains were obtained, and the transplantable MNNG/HOS strains were used in vivo to obtain tolerance.