臍帯平滑筋の増殖調節とその異常に関する分子生物学的研究

脐带平滑肌生长调控及异常的分子生物学研究

• 批准号: 09771262
• 负责人: 高木 靖
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771262/
• 关键词: 正常臍帯動脈; アポトーシス関連因子; TUNEL; bcl-2; Western blotting; 老化関連因子; PCR; テロメラーゼ活性; 臍帯動脈平滑筋細胞; 細胞周期調節因子; cyclinE; p21; p27; PCNA; ウエスタンブロッティング法; テロメレース

本年度は昨年に引き続き臍帯の分化及び老化を分子レベルで解析した。特に臍帯の分化及び老化にアポトーシスが関与するか否かを調べた。アポトーシス関連因子bcl-2を組織レベル、タンパクレベル、遺伝子レベルで解析し、実際にアポトーシスが起きているかどうか検討した。bcl-2について組織レベルで解析を行い、TUNEL(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labelling)法を用いてアポトーシスを検出した結果、僅かにアポトーシスが検出されたが、臍帯の週齢別では変化が無かった。また患者の同意を得た上で得られた正常臍帯動脈をcell lysis buffer中にてホモジネートしてタンパク質を抽出し、各30μgをSDS-PAGEにて分離、Western blotting法にてニトロセルロースフィルターに移してbcl-2の抗体を反応させ、ECLキットを用いて蛍光反応によりタンパク質発現を解析したがbcl-2のタンパク質の量は、臍帯の各週齢別では変化が無かった。次に臍帯の分化及び老化に老化関連因子であるテロメラーゼが関与するか否かを検討した。患者の同意を得た上で得られた正常臍帯動脈をcell lysis buffer中にてホモジネートしてタンパク質を抽出し、テロメラーゼアッセイを行った。抽出したタンパク質中のテロメラーゼはその3'末端にtelomeric repeatsという特定の配列を作るので、3'末端にtelomeric repeatsの配列を作らせ、telomerase productsはその3'末端にtelomeric repeatsの配列と、その配列に相補的なプライマーCX[5'-(CCCTTA)_3 CCCTAA-3']とdNTPを臍帯組織抽出液と混合し、PCRにて増幅、そのproductsを電気泳動にて検出した。その結果、各週齢の違った臍帯抽出したタンパク質では、各週齢でのテロメラーゼ活性の違いが見出せなかった。本課題全体を通じて、臍帯の発生ではその初期に、Cyclin Eが強く発現することを明らかにすることができた。

This year's "last year" introduces the differentiation and aging of molecules. Special attention should be paid to differentiation and aging. This is the most important factor in the organization of bcl-2. This is the first step in this paper. The bcl-2 organization parses the data, uses the TUNEL (TdT-mediated dUTP-biotin nick end labelling) method to analyze the results of the test, and makes sure that the results are displayed, and that the data is not available. The patient agreed to receive the following instructions: normal exercise, anti-bcl-2 antibody, 30 μ g bcl-2 antibody, 30 μ g bcl-2 antibody, respectively. The ECL system uses photosensitive light to analyze the data of the bcl-2 system, and to make sure that each user is free of charge. Secondary differentiation and aging. Factors of aging, aging, and aging. The patient agreed to obtain a normal response in the cell lysis buffer. In this section, we extract the specific configuration of the 3 'end telomeric repeats device, the 3' end telomeric repeats configuration, the 3 'end telomeric repeats configuration, the dNTP tissue extract mixer [5-(CCCTTA) _ 3 CCCTAA-3'] of the same configuration, the PCR profile of the tissue extract mixer, the end of the telomeric repeats configuration and the dNTP tissue extract mixture. The products swimming exercise will help you to get out of the game. The results of the test, the results of the test, the results, the results. In this project, all students are in the early stages of this project, and Cyclin E is very important in the early days of this project.