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成熟哺乳動物の網膜神経節細胞の細胞死の抑止と軸索再生に関する研究

抑制成年哺乳动物视网膜神经节细胞死亡和轴突再生的研究

基本信息

批准号：
09771453
负责人：
高野雅彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

網膜神経節細胞の標識:実験動物として成熟ラットをもちい、深麻酔後、脳固定装置にて頭部を固定、開頭し、四丘体上丘に蛍光色素Dilもしくは4Di-10Aspを注入し、その後実験動物を飼育した。これらの蛍光色素は視神経すなわち網膜神経節細胞の軸索を逆行性に伝わり、神経節細胞の細胞体を標識できた。この蛍光色素によって標識された網膜神経節細胞は1カ月以上飼育したラットでも観察可能であった。硝子体注入法および視神経注入法を用いて変性抑止因子、再生促進因子等を注入後飼育した。眼球を摘出後、網膜を単離し、標識された神経節細胞を蛍光顕微鏡にて観察、その生存数を計測した。この方法により軸索切断後の神経節細胞の変性による細胞数の減少を硝子体または視神経に注入した因子が変性を抑止しうるかを検討した。また、動物を潅流固定後、網膜・視神経の組織標本を作成し、細胞変性・神経再生を観察した。さらに再生軸索が視神経接合部位を越えて上丘に向かうかどうかを検討するために別の蛍光色素を視神経または上丘に注入し、軸索再生した神経節細胞を再標識した。蛍光顕微鏡下で二重染色された神経節細胞数を観察、細胞数を計測することで軸索再生を検証した。この結果、変性抑止因子および再生促進因子としてBDNF(brain-derived neurotrophic factor)を用いると神経節細胞の著しい減少がくい止められた。また、神経節細胞から再生したと考えられる再生軸索が視神経接合部に入っている所見が得られた。神経栄養因子であるBDNFが神経節細胞の変性抑止因子および再生促進因子として働く可能性が示唆された。今後、他の因子が同様に神経節細胞の変性を抑止し、さらに軸索再生を促進して、視神経障害後の視覚機能の回復に役立つ可能性を探求する予定である。

The identification of retinal ganglion cells: the animal is mature, the head is fixed, the head is fixed, the upper part of the four hills is irradiated with 4Di-10Asp, and the animal is raised. This light pigment is used to identify the axons of retinal ganglion cells and the cell bodies of retinal ganglion cells. The retinal ganglion cells were cultured for more than one month. Nitrate injection method and visual nerve injection method are used to cultivate the mice after injection with different inhibitory factors and regeneration promoting factors. After the eyeball was removed, the retina was separated, the ganglion cells were marked, and the survival rate was measured by light microscopy. The method is to reduce the number of cells in the ganglion after axonectomy, and to prevent the injection of nitrate into the ganglion. After fixation of animal flow, the retina, optic nerve tissue, and cell regeneration are observed. Regenerating axons are injected into the upper colliculus, and axons are re-labeled. The number of cells in the ganglion was measured by double staining under light microscope, and the axonal regeneration was detected. As a result, the expression of BDNF(brain-derived neurotrophic factor) is reduced in neurons. The nerve node cells are regenerated. The regeneration axis is seen in the junction of the nerve. Neurotrophic factors such as BDNF, inhibitors of neuronal activity, and promoters of regeneration may be involved. In the future, other factors will be involved in the inhibition of neuronal cell variability, the promotion of axonal regeneration, and the exploration of the possibility of functional recovery after visual impairment.