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組織培養法による網膜神経細胞の再生と機能回復に関する研究

组织培养法视网膜神经细胞再生及功能恢复的研究

基本信息

批准号：
06771523
负责人：
高野雅彦
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では成熟哺乳動物の網膜神経培養により、特に神経節細胞からの神経突起再生機構を明らかし、軸索の再生と標的神経細胞とのシナプスの再形成をはかり、さらに神経伝達機能の回復を実現することを目的とした。本年度は成熟哺乳動物としてラットをもちい網膜神経組織を培養した。実験動物の視神経を麻酔下にて眼窩内で血管系に影響を与えないように切断した。このとき同時にDiI等の蛍光色素を視神経に注入し網膜神経節細胞を標識した。数日間飼育後、その眼球を摘出し、collagen培養法またはlamininを基質とした組織培養法などの器官培養法をもちいて網膜神経組織を培養した。一定の条件を保つことにより神経突起の再生を得た。この培養系において蛍光色素により標識された神経細胞から神経突起が再生していること、この神経突起は特異的抗体による染色法により染色されることから網膜内層の神経節細胞からの再生突起であることが確認された。また培養液に様々な物質を添加し、その結果を検討することにより神経再生における促進因子、抑制因子を解明することができると考えられた。これらの研究から、サイトカインのうちinterleukin 1βおよびinterleukin 6 にも神経再生促進効果があることを見いだし、この研究の成果を平成6年4月の日本眼科学会にて概要を報告し、また同年11月の米国フロリダでのNeuroscience meeting にても報告した。現在、この結果を神経科学の専門誌に投稿予定である。今後もこの培養系をもちい、培養液中に様々な物質を添加して神経再生を解析し、また、硝子体注入による神経生存維持・再生促進効果をも検討することで成熟中枢神経の軸索再生機構を解明する予定である。

The aim of this study is to investigate the regeneration mechanism of neuronal processes in mature mammalian retinal neurons, especially in axonal regeneration and target neuronal cells, and to investigate the recovery of neuronal functions. This year, mature mammalian tissues were cultured. The visual system of animals is affected by anesthesia. At the same time, DiI and other light pigments are injected into the retinal ganglion cells. After several days of incubation, the eyeball was removed, collagen culture was used, laminin was used, and tissue culture was used. Certain conditions are required to ensure that the nerve processes are regenerated. This culture system is characterized by the presence of photochrome, which identifies the regeneration of neuronal processes in neurons, and by the presence of specific antibodies to neuronal processes in neurons of the inner retina. The results of the culture medium were analyzed. The results of this study were reported to the Japanese Academy of Ophthalmology in April 2006 and to the Neuroscience meeting in November 2006. Now, the results of this study are scheduled for submission to the Journal of Neuroscience. In the future, the culture system, the addition of substances to the culture medium, the analysis of nerve regeneration, the investigation of nerve survival maintenance and regeneration promotion effects, and the identification of axonal regeneration mechanisms in mature central nervous system will be discussed.