軸索切断後の網膜神経細胞の変性抑止と軸索再生に関する研究

熟成哺乳動物としてラットを用い、網膜を摘出培養し、網膜内の生存神経細胞と再生神経突起を観察することで神経再生促進因子の効果を検討した。あらかじめ上丘より蛍光色素DiIを用いて逆行性染色を行い、網膜神経節細胞を標識したのち、コラーゲン培養法をちいて無血清培養液にて網膜組織を培養した。この培養系において蛍光色素により標識された細胞が培養網膜において観察され、一部は培養中も生存できることを確認した。また、この標識細胞から神経突起が再生していること、抗Thy1抗体により染色されることからこの再生突起は網膜神経節細胞の再生突起であることを確認した。さらにこの培養液に各種の神経栄養因子を添加し、その網膜内の神経節細胞の変性過程を蛍光顕微鏡下で観察検討した。この研究から神経栄養因子のうち神経成長因子('nerve growth factor:NGF)、脳由来神経栄養因子(brain-derived neurotrophic factor:BDNF)およびニューロトロフィン-4(neurotrophin-4:NT-4)に神経変性抑止効果があることを見いだした。またこれらの物質により再生突起の増加が観察され、神経再生促進効果も確認できた。今後もこの培養系をもちい、培養液中に様々な物質を添加して成熟哺乳動物網膜の神経再生を解析すること、さらにこれら変性抑止因子、神経再生促進因子を生体系において応用し、中枢神経細胞からの軸索再生機構について研究を進める予定である。

熟成哺乳動物としてラットを用い、網膜を摘出培養し、網膜内の生存神経細胞と再生神経突起を観察することで神経再生促進因子の効果を検討した。あらかじめ上丘より蛍光色素DiIを用いて逆行性染色を行い、網膜神経節細胞を標識したのち、コラーゲン培養法をちいて無血清培養液にて網膜組織を培養した。この培養系において蛍光色素により標識された細胞が培養網膜において観察され、一部は培養中も生存できることを確認した。また、この標識細胞から神経突起が再生していること、抗Thy1抗体により染色されることからこの再生突起は網膜神経節細胞の再生突起であることを確認した。さらにこの培養液に各種の神経栄養因子を添加し、その網膜内の神経節細胞の変性過程を蛍光顕微鏡下で観察検討した。この研究から神経栄養因子のうち神経成長因子('nerve growth factor:NGF)、脳由来神経栄養因子(brain-derived neurotrophic factor:BDNF)およびニューロトロフィン-4(neurotrophin-4:NT-4)に神経変性抑止効果があることを見いだした。またこれらの物質により再生突起の増加が観察され、神経再生促進効果も確認できた。今後もこの培養系をもちい、培養液中に様々な物質を添加して成熟哺乳動物網膜の神経再生を解析すること、さらにこれら変性抑止因子、神経再生促進因子を生体系において応用し、中枢神経細胞からの軸索再生機構について研究を進める予定である。