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組織培養法による成熟網膜神経細胞の軸索再生に関する研究

组织培养法研究成熟视网膜神经元轴突再生

基本信息

批准号：
07671930
负责人：
高野雅彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

成熟哺乳動物としてラットをもちい網膜組織を培養、再生神経突起の本数を計測することで神経再生促進因子の効果を検討した。あらかじめ上丘よりDiI,Fluoregoldなどの蛍光色素による逆行性染色にて網膜神経節細胞を標識したのち、コラーゲン培養法をもちいて無血清培養液にて網膜組織を培養した。この培養系において蛍光色素により標識された神経細胞から神経突起が再生していること、また、この神経突起は抗Thy 1抗体により染色されることから網膜内層の神経節細胞からの再生突起であることが確認できた。さらにこの培養液に4種類の神経栄養因子を各々添加し、その神経再生促進効果を検討した。この研究から神経栄養因子のうち脳由来神経栄養因子(brain-derived neurotrophic factor:BDNF)およびニューロトロフィン-4(neurotrophin-4:NT-4)に神経再生促進効果があることを見いだした。また培養初期には神経成長因子(nerve growth factor:NGF)にも神経再生促進効果が見られたがこの効果は培養日数が経つにつれ消失した。ニューロトロフィン-3(neurotrophin-3:NT-3)には培養期間を通じて神経再生促進効果はみられなかった。また、成人ヒト網膜をもちいた組織培養にても同様の結果が得られた。今後もこの培養系をもちい、培養液中に様々な物質を添加して成熟哺乳動物網膜の神経再生を解析し、中枢神経細胞からの軸索再生機構とその促進因子について研究を進める予定である。

To investigate the effects of neural regeneration promoting factors in mature mammals The retinal ganglion cells were identified and cultured in serum-free culture medium by retrograde staining. This culture system is characterized by the presence of photochrome, which identifies the regeneration of neuronal processes from neurons in the inner layer of the retina, and anti-Thy 1 antibodies. In this paper, four kinds of neurotrophic factors were added to the culture medium, and the effect of neuroregeneration was discussed. This study indicates that the neurotrophic factor is derived from brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and neurotrophic factor-4 (neurotrophin-4:NT-4), which promotes neuroregeneration. In the early stage of culture, nerve growth factor (NGF) and nerve regeneration promotion effect were observed and disappeared. The neurotrophin-3 (NT-3) is a new type of neurotrophic hormone. The results of tissue culture in adults were similar. In the future, the study on the mechanism of axonal regeneration and the promotion factors of retinal regeneration in mature mammals will be carried out by adding substances to the culture system and culture medium.