耳下腺Ca^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2の多様性とその生理的機能分担

腮腺Ca^2+非依赖性磷脂酶A_2的多样性及其生理功能

• 批准号: 09771558
• 负责人: 神谷 真子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Asahi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771558/
• 关键词: Ca^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2; 分泌顆粒膜; 細胞質; 腺腔側形質膜; 細胞内局在性; bromoenol lactone; 可溶化

本研究は、ラット耳下腺細胞におけるCa^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2(iPLA_2)の多様な存在特性を明らかにするために、その耳下腺細胞内分布および性状を検討したものである。iPLA_2の細胞内分布に関しては、平成9年度に各細胞画分における活性検索が終了しており、既に報告した分泌顆粒(SG)と腺腔側形質膜(PM)に加え、新たに細胞質でもiPLA_2の存在が確認された。本年度は引き続き3画分由来iPLA_2の詳細な特性観察を進めその相同性を検討した。3画分のiPLA_2のうち、細胞質iPLA_2(Cyt-iPLA_2)は1)ATPとTriton X-100で活性化される、2)Ca^<2+>-依存性PLA_2特異的阻害剤(AACOCF_3)でほとんど阻害されずbromoenol lactone(BEL)で阻害される点から、VI型に分類される酵素であると考えられた。一方SGとPM由来iPLA_2(SG-iPLA_2、PM-iPLA_2)は、ATP、界面活性剤およびAACOCF_3に対してCyt-iPLA_2と類似の挙動を示したが、BELで阻害されない点でCyt-iPLA_2と異なっていた。また、SG-およびPM-iPLA_2には、既知の細胞内PLA_2に共通の阻害剤(metyl arachidonyl fluoro-phosphonate)も無効であったことから、両酵素は新たなタイプのiPLAであると考えられた。SG-およびPM-iPLA_2はsn-2位不飽和型中性リン脂質を最も良い基質とするなど基質特異性の面でも類似しており、一連の生化学的性質からは両者を明確に区別することができなかった。以上の結果は、耳下腺細胞内にはVI型に分類されるCyt-iPLA_2と、SGとPMに共通して存在する新たなタイプのiPLA_2の少なくとも2種類の酵素が存在する可能性を示唆するものである。今後はSG-およびPM-iPLA_2の精製と構造解析を進め両酵素の相同性を厳密に検討すると共に、これら耳下腺iPLA_2の開口分泌などの生理機能への関与を検討していく予定である。

This study aims to clarify the diverse existence characteristics of Ca ^<2 +>-independent A_2 (iPLA_2) in rat sublingual gland cells, and to investigate the intracellular distribution and properties of the Ca ^<2 +>-independent A_2 in sublingual gland cells. The intracellular distribution of iPLA_2 was related to the activity of iPLA_2 in each cell segment in 2009. The presence of iPLA_2 in the cytoplasm of both secretory granules (SG) and glandular plasma membrane (PM) was confirmed. This year's review of iPLA_2 's detailed characteristics is part of the review of its identity. 3. Cytoplasmic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 1) ATP and Triton X-100 activation; 2) Ca ^<2 +>-dependent PLA_2-specific inhibitor (AACOCF_3): 1) inhibition of bromoenolactone (BEL): 2) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 3) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 3) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 4) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 5) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 6) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 4) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 5) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): 6) inhibition of cytosolic iPLA_2 (Cyt-iPLA_2): One of them is derived from iPLA_2 (SG-iPLA_2, PM-iPLA_2), ATP, interface active agent and AACOCF_3. The other is Cyt-iPLA_2 and similar active agent. The other is BEL. In addition, we also found that there was no significant difference between the known intracellular PLA_2 inhibitor (metyl arachidonyl fluorophosphate) and the new enzyme PM-iPLA. SG-2 and PM-iPLA_2 are unsaturated-neutral lipids with the sn-2 position. They are the most suitable substrates for matrix specificity. They are similar in surface and biochemical properties. These results indicate the possibility of the existence of a new type of IPLA_2 and a few types of enzymes common to Cyt-iPLA_2, SG and PM in auricular gland cells. In the future, the purification and structural analysis of SG-2 and PM-iPLA_2 will be further studied, and the relationship between the identity of the enzyme and the physiological function of the open secretion of SG-2 and PM-iPLA_2 will be discussed.

项目成果

Masako Mizuno-Kamiya: "ATP-mediated activation of Ca^<2+>-independent phospholipase A_2 in the secretory granular membranes from the rat parotid gland" The Journal of Biochemistry. 123・2. 205-212 (1998)

Masako Mizuno-Kamiya：“大鼠腮腺分泌颗粒膜中Ca^2+-独立磷脂酶A_2的ATP介导的激活”生物化学杂志123・2（1998）。

Akira Shinkai: "Analyses of membrane phospholipid compositions and their physical properties in rat parotid gland" Journal of Gifu Dental Society. 25・2(印刷中). (1998)

Akira Shinkai：“大鼠腮腺膜磷脂组成及其物理性质的分析”《岐阜牙科学会杂志》25·2（出版中）。