中枢作働成分、crocinに対するモノクローナル抗体の作製とその応用
中枢作用成分藏红花素单克隆抗体的制备及应用
基本信息
- 批准号:09771911
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 1998
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
平成9年度は、実施計画に従い、crocinに対するモノクローナル抗体(MAb)の作製を行った。数種の抗crocinMAb産生ハイブリドーマを作製し、また、得たハイブリドーマの産生する抗体を用いた競合法によるELISAを確立した。平成10年度は、実施計画に従い、イムノアフィニティーカラムの作製を行った。数種のハイブリドーマの産生するMAbは、何れも同様にcrocetin配糖体に対して広範な交差反応性を示したため、今回は最も活性の高かった1A12を用いた。ハイブリドーマ1A12をマウス腹腔にて培養し、MAbを含んだ腹水を採取した。腹水をプロテインGアフィニティーカラムに付し、MAb 1A12を精製した。精製したMAb 1A12(17mg)の糖部をNalO_4により開環活性化し、ヒドラジンカラムと結合(結合率:99.6%)、イムノアフィニティーカラム(容量=3.5ml)を作製した。Crocetin配糖体(400 μg)をPBSに溶解し、PBSを用い初期化したカラムに付した。4hrペリスタポンプを用いてカラム内を循環(1ml/min)させた。PBSを用いカラムを洗浄した後、各種溶離液を流し溶出率を算出した。その結果、溶離液として100mM acetate buffer(pH4)-0.5 MKSCN-20%MeOHを用いた場合、90%以上溶出することを確認した。 また、キャパシティーはcrocinに対しては 20μg/ml gelであり、crocetin diglucosideに対しては8.4μg/ml gel、crocetin triglucosideに対しては19μg/ml gelであった。本イムノアフィニティーカラムは、crocin代謝産物含有組織エキスの分離精製等、crocinの体内動態研究に応用可能である。
In 2009, the production of MAb was carried out according to the implementation plan. Several anti-crocin MAbs were produced using competitive ELISA. In 2010, the implementation plan was implemented, and the production system was implemented. A number of crocetin ligands are present. 1A-12. MAb 1A12 is refined. Purified MAb 1A12(17mg) was prepared from NalO_4 by ring-opening activation, binding (binding ratio:99.6%) and purification (volume =3.5ml). Crocetin ligand (400 μg) was dissolved in PBS, and the initial phase of PBS was performed. 4hr Select the right position to use the right position (1ml/min). After washing with PBS, the dissolution rate of various eluents was calculated. The results were confirmed when the dissolution solution was 100mM acetate buffer(pH4)-0.5 MKSCN-20%MeOH.また、キャパシティーはcrocinに対しては 20μg/ml gelであり、crocetin diglucosideに対しては8.4μg/ml gel、crocetin triglucosideに対しては19μg/ml gelであった。This article is about the separation and purification of crocin metabolites containing tissues, and the possible use of crocin in vivo dynamic research.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
L.J.Xuan,H.Tanana,Y.Xu,Y.Shoyama: "Preparation of monoclonal antibody against crocin and its characterization" Cytotechnology. (in press).
L.J.Xuan,H.Tanana,Y.Xu,Y.Shoyama:“抗藏红花素单克隆抗体的制备及其表征”细胞技术。
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