Development of immunoassays for bioactive polysaccharides in Poria and Ziziphi Fructus

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本研究課題は、漢方薬の約31％に配剤されているタイソウ（大棗）及び約32％に配剤されているブクリョウ（茯苓）の科学的品質評価法の確立を目指し、各々の生薬に含まれる特徴的な多糖を指標とした免疫化学的分析法を開発することを目的とする。タイソウおよびブクリョウは、補体活性化作用、がん細胞増殖抑制作用や抗炎症作用等を有する様々な多糖を含み、これらは重要な指標成分と考えられることから、申請者は各々の生薬に含まれる多糖に対するモノクローナル抗体（mAb）を作製し、続いて、迅速・簡便で信頼性のある酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)や免疫染色法の開発を進める。研究の後半では、確立した種々の免疫化学的分析法を生薬の品質評価や生体内における多糖の吸収、代謝、体内動態等の解析へ適用することで、生薬由来機能性多糖を対象とした免疫化学的分析法の有用性、実用性を明らかにする。令和４年度は、ブクリョウ、タイソウ由来水溶性多糖を認識するモノクローナル抗体（mAb）の作製を中心に行った。まず、各生薬の水性エキスから多糖画分を調製した。生薬エキスには様々な成分が含まれている。そこで、適切な透析膜を活用して、高分子の成分を含む試料を得た後、タンパク質をできる限り除くことで、多糖画分得ることに成功した。その後、各多糖エキスを免疫原としてマウスに感作を行った。その結果、血清中に各生薬多糖フラクションに特異性を有する抗体の産生をELISAにより確認することができた。今後は、抗体価が上昇した段階で細胞融合を実施した後、mAb産生ハイブリドーマの作製を進めていく計画である。