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アポトーシスにおけるPKCδ ε θの限定分解の生理的意義の解明

阐明细胞凋亡中 PKCδ ε θ 有限降解的生理意义

基本信息

批准号：
09780578
负责人：
水野恵子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780578/
关键词：
protein kinase C apoptosis 限定分解細胞周期 lionited proteolsis

项目摘要

申請者はこれまでに、ヒト血球細胞細胞のapoptosisに伴い、Ser/Thrリン酸化酵素の一種、プロテインキナーゼC(PKC)が限定分解を受け、その結果活性を有したままの活性部位断片と制御部位断片が細胞内に蓄積することを明らかにした。これらの現象は複数あるisoformのうち、PKCδ、ε、及びθで顕著にみられるが、α、βII、ζではみられなかった。そこでリコンビナントのPKCδ活性部位断片を作製し、マーカー遺伝子GFPと供に、細胞への導入実験を行ったところ、GFP発現した細胞の数が極端に減少し死細胞が多く見られた。一部の細胞ではapoptosisの特徴である細胞の縮小や核の凝集、或いは断片化が認められた。点変異を加えることにより活性型としたPKCδの場合も同様の結果が得られたが、野生型のδやATP結合部位に変異を加えた不活性型の活性部位断片ではこの様な効果が見られなかった。即ちPKCδは限定分解により活性化され、何らかの基質のリン酸化を介することによりapoptosisの進行に寄与していることが示唆された。一方、PKCδ制御部位断片を高発現したCOS細胞やNIH3T3細胞では、コントロールに比べ多核を呈した細胞の割合が有意に増えた。これは細胞質分裂が阻害されたことによると考えられるが、野性型PKCδではこの様な効果は見られなかった。また、繊維芽細胞を用いた実験から、野生型のPKCδはG1からS期への進行に寄与しDNA合成を促進することが明らかになった。δ制御部位断片の高発現は内在性のδに対し優勢抑制型に働きこれを阻害した。以上のことから、限定分解により生じたPKCδの制御部位断片はDNA合成や細胞分裂を抑制することによって細胞の正常な増殖周期を阻害し、細胞がapoptosisのシグナルを受けやすくしている可能性が示唆された。

The applicant has the ability to regulate the intracellular accumulation of Ser/Thr acidifying enzymes in erythrocytes and erythrocytes. The phenomena of In addition, the number of PKC delta active site fragments, GFP gene supply, cell introduction, GFP gene expression, and cell death were extremely reduced. A part of the cell is characterized by apotosis. The cell is reduced and the nucleus is aggregated or fragmented. In addition, the active PKC delta fragment was found to be different from the wild type in the ATP binding site. That is, PKCδ is activated in a limited manner, and the substrate is acidified in a limited manner. A high level of PKC delta control fragments was observed in COS cells and NIH 3T3 cells. The wild PKC delta is the result of the cytokinesis. The wild type PKC delta gene is used to promote DNA synthesis in the G1 phase.δ-control fragment is intrinsic to δ-control fragment, and δ-control fragment is dominant to δ-control fragment. The above results indicate the possibility of inhibiting the normal growth cycle of cells by inhibiting the production of PKC delta regulatory fragments and inhibiting cell division.