1型ヒト免疫不全ウイルスのVpr蛋白質の構造と機能に関する研究

1型人类免疫缺陷病毒Vpr蛋白的结构与功能研究

• 批准号: 10770135
• 负责人: 北村 義浩
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770135/
• 关键词: HIV; インテグラーゼ; モノクローナル抗体; Vpr; Viral protein; 単鎖抗体

HIVのインテグラーゼに対するマウスモノクローナル抗体を作製し、このマウスモノクローナル抗体から単鎖抗インテグラーゼ抗体分子(scAbE)を作製した。scAbEとHIVのアクセサリータンパク質であるVprとの融合タンパク質(scAbE-Vpr)、およびVprと結合することが明らかになっているペプチドモチーフ(WxxF)を付加したscAbE分子(scAbE-WxxF)を作製した。さらにscAbEとHIVのキャプシッドタンパク質(CA)との融合タンパク質(scAbE-CA)も作製した。これらタンパク質を発現するヘクターDNAをHIV infectious clone DNA(pLAI)とともにヒト細胞293Tにtransfectして培養上清中のウイルスを回収した。ウイルス粒子のタンパク質について、ウェスタンブロット法で調べたところscAbE-VprとscAbE-WXXFは効率よくウイルス粒子内に取り込まれていた。しかし、scAbEあるいはscAbE-CAはウイルス粒子には取り込まれなかった。これらウイルスの感染性をMAGIアッセイ法にて調べた。同じ量のRT活性で比較した場合、野生型ウイルスに比べてscAbE-Vprを取り込んだウイルスとscAbE-WxxFを取り込んだウイルスとでは、感染性が最大で、それぞれ10^3倍、10^4倍低下した。scAbE-WxxFを安定に発現するHeLa細胞を樹立できたが、その一方で、scAbE-Vprを安定に発現するHeLa細胞は得られなかった。このようにウイルス粒子に取り込まれてそのウイルス粒子の感染性を低下せしめる分子は全く新規の抗ウイルス治療分子であるので、packageable ativiral therapeutics(PAT)と命名した。scAbE-Vprとは異なりscAbE-WxxFは細胞毒性を呈さず、より理想的なPAT分子と思われた。この分子はAIDSの遺伝子治療に応用できるだろう。

HIV virus infection is caused by the presence of anti-HIV antibody molecules (scAbE). scAbE and Vpr are integrated into each other. scAbE and Vpr are integrated into each other. scAbE and Vpr are integrated into each other. Today scAbE and HIV are controlled by the CA and scAbE-CA. HIV infectious clone DNA(pLAI) and HIV infectious clone DNA(pLAI) were found in the supernatant of the cell culture. The particle size distribution and particle size distribution are discussed in detail.しかし、scAbEあるいはscAbE-CAはウイルス粒子には取り込まれなかった。The infection of the virus was detected by MAGI. When RT activity of wild-type was compared with that of scAbE-Vpr at the same level, its infectivity was the highest, 10^3-fold and 10^4-fold lower than that of scAbE-Vpr. scAbE-WxxF stable HeLa cells are established, and scAbE-Vpr stable HeLa cells are established. The name of the molecule is packageable ativiral therapeutics(PAT). scAbE-WxxF is an ideal PAT molecule. These molecules are used in AIDS gene therapy.

项目成果

Ishikawa T.,Okui N.,Kobayashi N.,Sakuma R.,Kitamura T.and Kitamura Y.: "Monoclonal antibodies against the minimal DNA-binding domain in the carboxyl-terminal region of human immunodeficiency virus type 1 integrase"Journal of Virology. 73・5. 4475-4480 (199

Ishikawa T.、Okui N.、Kobayashi N.、Sakuma R.、Kitamura T. 和 Kitamura Y.：“针对人类免疫缺陷病毒 1 型整合酶羧基末端区域最小 DNA 结合结构域的单克隆抗体”Journal of病毒学。73・5。4475-4480（199）

Ogata T.,Okui N.,Sakuma R.,Kobayashi N.and Kitamura Y.: "Integrase of Human Endogenous Retrovirus K-10 Supports Replication of Incompetent Int-Human Immunodeficiency Virus Type 1 Mutant"Japan Journal of Infections Diseases. (印刷中). (2000)

Ogata T.、Okui N.、Sakuma R.、Kobayashi N. 和 Kitamura Y.：“人内源性逆转录病毒 K-10 的整合支持无能力的人类免疫缺陷病毒 1 型突变体的复制”日本传染病杂志（印刷版） ）（2000）

Okui N.,Sakuma R.,Kobayashi N.,Yoshikura H.,Kitamura T.,Chiba J.and KitamuraY.: "Packageable antiviral therapeutics against human immunodeficiency virus type 1 : virion-targeted virus inactivation by incorporation of a single-chain antibody against viral

Okui N.、Sakuma R.、Kobayashi N.、Yoshikura H.、Kitamura T.、Chiba J. 和 KitamuraY.：“针对人类免疫缺陷病毒 1 型的可包装抗病毒疗法：通过掺入单链来实现病毒粒子靶向病毒灭活”

Nobuo Okui,Noriko Kobayashi,Yoshihiro Kitamura: "Production of uninfectious human immunodeficiency virus type 1 containing viral protein R fused to a single-chain antibody against viral integrase" Journal of Virology. 72. 6960-6964 (1998)

Nobuo Okui、Noriko Kobayashi、Yoshihiro Kitamura：“生产含有与抗病毒整合酶单链抗体融合的病毒蛋白 R 的非传染性人类免疫缺陷病毒 1 型”病毒学杂志。